小鼠细胞因子趋化因子磁珠试剂盒.doc

MILLIPLEX? MAP 小鼠细胞因子/趋化因子磁珠试剂盒 96孔板分析 # MCYTOMAG-70K 或 # MCYTOMAG-70K-PMX (预混合 25 plex) #MCYTMAG-70K-PX32 (预混合32 plex) 前言 “细胞因子”是不同类型的可溶性蛋白质和多肽，能在正常或病理条件下调节细胞和组织的功能活性。这些蛋白质同样介导细胞间直接的相互作用，调节过程发生在细胞外环境中。细胞因子与激素不同的是它们作用的靶细胞范围更广。与激素不同，它们不是由特定腺体中特定的细胞产生的。细胞因子白细胞介素、干扰素集落刺激因子趋化因子。ɑ，MIP-1β， MIP-2， RANTES， TNFα和 VEGF。 原理 MILLIPLEX MAP 基于Luminex? xMAP? 技术——是发展最迅速、最令人敬佩的多种技术之一，提供的应用遍及生命科学而且能够用于多种生物分析，包括表面标记荧光的磁珠免疫分析，已知的MagPlex TM-C的微磁珠。 Luminex? 专利技术使用含有两种荧光染料的内在颜色编码微球。这些染料具有准确的浓度，能够制造100种不同颜色的珠子，每个珠子上都包被有特异性的捕获抗体。 检测样本中的分析物被珠子捕获后，加入生物素标记的检测抗体。 反应复合物与链霉亲和素-PE结合、孵育，链霉亲和素-PE是完成每个微球表面反应的报分子。 微球迅速通过第一种激光，激发微球标记的内部染料。第二种激光激发报告分子上的荧光染料——PE。 最后，高速数字信号处理识别每个微球，通过荧光报告信号定量生物分析的结果。 给每个标本加多种包被的珠子可以从每个标本得到多种结果。开放式结构xMAP?技术使多种类型的生物分析联合使用，比传统方法节省时间、人力和成本。 收到试剂后立刻储存的条件 试剂盒成分推荐的储存温度为2-8 ℃。 标准品和质控品一旦复溶，立即转移到聚丙烯瓶。不要将标准品或质控品储存在玻璃瓶。若要长时间储存，将复溶的标准品和质控品在 ≤-20℃冰冻。避免多次( 2)冻融。 不要冰冻抗体包被的珠子、检测抗体和链霉亲和素-藻红蛋白。 提供的试剂 注意：2 - 8℃保存所有试剂 小鼠细胞因子/趋化因子抗体包被的预混合珠子： 　　 内含根据用户选择分析的小鼠细胞因子/趋化因子抗体包被的珠子。 小鼠细胞因子/趋化因子抗体包被的珠子： 需要但没有提供的材料 试剂 1、Luminex鞘液(Luminex Catalogue #40-50000) or Luminex 驱动液(Luminex Catalogue # MPXDF-4PK) 方法/材料 可调节的带有枪头的可释放25-1000μL加样枪 多通加样枪，可释放5μL --50μL或25μL--200μL 试剂储存库 聚丙烯微量离心管 橡皮筋 铝箔 吸水垫 实验室旋涡混合器 超声波破碎仪(Branson Ultrasonic Cleaner Model# B200或相当的) 滴定板振荡器(Lab-Line Instruments Model# 4625或相当的) 装有Luminex公司xPONENT 软件的Luminex 200?， HTS， FLEXMAP 3D? 或 MAGPIX? 仪器 磁珠自动洗板机(Bio-Tek ELx405， Millipore catalog #40-015或相当的) 或者手持式磁性分离块 (Millipore catalog # 40-285或相当的) 注意：如果没有磁珠洗板机或手持式磁性分离块，可以使用微量滴定滤板(Millipore Catalog# MX-PLATE)进行分析，可使用真空过滤装置(多通道微孔真空器Catalog #MSVMHTS00或相当的，还要有微孔真空泵Catalog# WP6111560或相当的) 安全警告 所有的血的成分和生物材料应该作为潜在的危险物质。当操作和处理传染性病原体时应遵守疾病预防和控制中心及职业安全与健康管理局制定的通用安全警告。 在某些试剂中加了叠氮化钠或Proclin作为防腐剂。虽然浓度低，但叠氮化钠和Proclin可能与铅和铜管道发生反应，形成高度爆炸性的金属叠氮化物。在处理上用大量的水冲洗以防止叠氮化物形成。 技术指导 为了获得可靠的和可重复的结果，操作者在做实验之前应仔细阅读整个手册并完全理解每个分析步骤的所有部分。以下注意事项应该在实验前回顾和理解。 仅用于研究。不适用于诊断操作。 超过标签上有效期的不要使用。 不要把本试剂与其它来源的试剂混合或用替代试剂。 抗体包被的珠子对光敏感，必须一直远离光线。在所有的孵育步骤中，用不透明的板或者铝箔遮盖含有珠子的分析板。 所有的