实验室环境和人体表面的微生物检查_山东大学.doc

实验室环境和人体表面的微生物检查 【实验目的】【实验】【实验】 将2包培养皿（每包10个）、2支装有无菌水的试管、2个装有培养基的锥形瓶，用牛皮纸包好并标记，置于高压蒸汽灭菌锅中灭菌20min。 倒平板 将取出的培养基冷却至50℃左右时（手可以触摸的温度），开始倒平板，右手持盛培养基的三角烧瓶，在火焰旁，左手取下瓶塞，使瓶口保持对着火焰；左手持培养皿翻转并将皿盖在火焰旁打开一点，迅速倒入培养基约15ml（恰好覆盖培养皿底部），然后放在桌面上，待凝固后即为平板。然后将其倒置备用。 微生物的接种。接种过程要完全严格在火焰附近进行，操作要尽量迅速准确 在空气中取样6组。取3个培养皿开盖暴露于空气中5min后盖好，并分别标记后将其中一个平板置于27°C环境下培养，另外两个平板置于37°C环境下培养；另取3个培养皿开盖暴露于空气中10min后盖好，并分别标记后将其中一个平板置于27°C环境下培养，另外两个平板置于37°C环境下培养。 桌面取样3组。取3个培养皿，用浸灭菌水后的无菌棉签在桌面上擦拭后在培养基上划线，并分别标记后将其中一个平板置于27°C环境下培养，另外两个平板置于37°C环境下培养。 手表面取样6组。取3个平板，分别用浸灭菌水后的无菌棉签在未洗的手上擦拭几下后在培养基上划线，并分别标记后将其中一个平板置于27°C环境下培养，另外两个平板置于37°C环境下培养；另取3个平板，分别用浸灭菌水后的无菌棉签在洗过的手上擦拭几下后在培养基上划线，并分别标记后将其中一个平板置于27°C环境下培养，另外两个平板置于37°C环境下培养。 自选（钱）取样2组。取2个平板，用浸水后的无菌棉签在钱上擦拭后在平板上划线，并分别标记后将其中一个平板置于27°C环境下培养，另外一个平板置于37°C环境下培养。 自选（手机）取样1组。取1个平板，用无菌棉签蘸取少量碱液后在平板上划线，并标记后将平板置于37°C环境下培养。 培养 将接种好的18个平板及两个对照平板分别置于恒温箱中培养一周。 观察 观察菌落的形态，区分细菌与霉菌 对单个细菌的菌落进行描述，应该对菌落的大小（大、中，小），颜色（白，黄，粉红等），干湿（干、湿），边缘（整齐，不整齐），表面（光滑，粗糙，有无突起等）分别进行阐述并详细记录。 在不同的培养条件下对菌落的数量及种类进行比较,并找出不同培养条件下的相似菌，并对相似菌进行描述。 划线分离与菌种的纯化 从第六步观察到的菌落中挑选两个进行划线分离操作。如图所示，先在平皿上划定区域，然后将接种针在火焰上进行灭菌操作，取含菌种的培养皿，在火焰上方（注意：不能离火焰太近）打开培养皿盖，先拿接种针在上盖处划线以降温，然后用接种针轻挑所选菌落一到两下，将平皿盖上放好，再取刚刚冷却了的干净平皿在1区进行划线接种操作。操作完毕后对接种针进行灭菌操作，完成后在火焰上方打开平皿盖，将接种针冷却后从1区引线到2区，再如图所示划线，划完后引线到3区，同上进行划线，划线完毕后盖盖平放，贴好标签后在37℃条件下培养。同以上方法对另一菌落进行接种与培养操作。 【实验】– 37℃ 26 5 表3：相似菌记录 样品来源 菌种特征 2—3—空气—10s—37℃ 菌落中等偏大，乳黄色，表面湿润，边缘整齐，光滑隆起 2—2—洗手前—27℃ 【实验】【】PH值应调节为7.0-7.2之间，并且在加入NaOH溶液时要注意不要加入过量，因为即使后期用HCl溶液中和调节，生成的盐类物质仍然会影响培养液的配制。 培养基配方的选定：同一种培养基的配方在不同著作中常会有某些差别。因此，除所用的是标准方法，应严格按其规定进行配制外，一般均应尽量收集有关资料，加以比较核对，再依据自己的使用目的，加以选用，记录其来源。 每次制备培养基均应有记录，包括培养基名称，配方及其来源，和各种成份的牌号，最终pH值、消毒的温度和时间制备的日期和制备者等，记录应复制一份，原记录保存备查，复制记录随制好的培养基一同存放、以防发生混乱。 培养基的各种成分必须精确称取并要注意防止错乱，最好一次完成，不要中断。可将配方置于傍侧，每称完一种成分即在配方面军做出记号，并将所需称取的药品一次取齐，置于左侧，每种称取完毕后，即移放于右侧。完全称取完毕后，还应进行一次检查。 培养基所用化学药品均应是化学纯的。使用的蒸煮锅不得为铜锅或铁锅，以防有微量铜或铁混入培养基中，使细菌不易生长。最好使用不锈钢莴加热溶化，可放入大烧杯或大烧瓶中置高压蒸汽灭菌器或流动蒸汽消毒器中蒸煮溶化。在锅中溶化时、可先用温水加热并随时扰动、以防焦化、如发现有焦化现象、该培养基即不能使用，应重新制备。待大部分固体成分溶化后，再用较小火力使所有成分完全溶化，迄至煮沸。如为琼脂溶化，用另一部分水溶化其它成分，然后将两