玛咖多糖的抗疲劳作用研究.doc

朱学良 罗彤 叶伟 饶邦福 王阿敬 陈栋梁1武汉肽类物质研究所?? 2武汉天天好生物制品有限公司??? 3武汉多肽抗衰老研发有限公司 ??? 摘要：为了观察玛咖多糖对小鼠的抗疲劳作用，本研究采用水提醇沉法提取玛咖粗多糖，通过Sevag法去蛋白，纯化多糖。将60只雄性昆明小鼠随机分为正常对照组，高、中、低剂量给药组。高、中、低剂量给药组分别按2．25g／kg‘d、1．5g／kg‘d、0.75g／kg?d灌胃玛咖多糖，正常对照组以等体积生理盐水灌胃，连续灌胃10d后对小鼠进行负重游泳实验及血清指标测定。结果表明：三个剂量组玛咖多糖均能延长小鼠游泳时间，增强小鼠血清超氧化物歧化酶(SOD)活力，减少小鼠血清中丙二醛(MDA)的生成，提高小鼠抗疲劳能力，并呈剂量 功效依赖关系。因此，玛咖多糖的抗疲劳、提高运动能力与其抗氧化作用相关。 ??? 关键词：玛咖多糖抗疲劳抗氧化 ??? 1前言 ??? 运动性疲劳是由多因素引起的，长时间以来人们一直致力于对运动性疲劳的研究。到目前为止，虽然对于运动性疲劳产生的原因还没有一个完整的定论，但大多认为运动性疲劳的产生与体内自由基的累积有关。 ??? 在正常情况下，生物体内自由基浓度是极低的，体内防御体系能有效地清除所产生的自由基，使自由基处于平衡状态，保护机体组织细胞免受自由基氧化损伤。但在运动中有氧代谢增强，由此可以促进氧自由基生成，尤其在高强度的力竭性运动中氧自由基的累积会引起脂质过氧化产物丙二醛(MDA)含量的明显升高，导致肌纤维膜及线粒体膜等生物膜完整性丧失及损伤，从而引发一系列细胞代谢机能紊乱，使肌肉工作能力下降产生疲劳。因此，长时间的力竭运动使体内氧自由基累积是造成身体疲劳的一个主要原因。超氧化物歧化酶(SOD)是细胞防御氧自由基的第一道纺线，其作用是歧化超氧阴离子(O2)，使生物体免受氧自由基氧化损伤。因此，通过测定机体血液中SOD的活力和脂质过氧化产物MDA的含量可以预测机体的疲劳状况。 ??? 玛咖(Lepidium meyenii Walpers)是原产于秘鲁安第斯山区的草本植物，属于十字花科独行菜属 a。玛咖的栽培和食用历史悠久，主要食用部分为成熟膨大的块根。在南美地区，当地人主要用其作为食物，也作为传统药物使用。玛咖具有抗疲劳、改善性功能、提高生育能力等多种功效 ，因而有“南美人参”的美誉。由于玛咖的适应原样作用，以玛咖为主要原料的保健品风靡全球，有关玛咖的研究和开发也受到了广泛的重视。玛咖中除含有丰富的蛋白质、氨基酸、矿物质等营养物质外，还含有玛咖烯、玛咖酰胺等活性物质，其中玛咖多糖也是玛咖中含量较丰富的活性物质。活性，而对其抗疲劳活性的研究国内外至今未见报道。本文通过小鼠负重游泳实验及血清指标测定，对玛咖多糖抗疲劳作用进行了研究。 ??? 2材料与方法 ??? 2.1材料、仪器与试剂 ??? 玛咖根干燥粉末 ??? 昆明种小鼠，雄性，体重(20±2)g，由湖北省医学科学院实验动物中心提供。 ??? 超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)，离心沉淀机(上海医用分析仪器厂)，真空旋转蒸发器RE52—99 (上海亚荣生化仪器厂)，电热恒温水浴锅(天津市泰斯特仪器有限公司)，UV一2501 PC分光光度计(日本岛津)，电热恒温干燥箱(天津市泰斯特仪器有限公司)，游泳箱(70cm×50cm×40cm)，SHB—B95型循环水式多用真空泵(郑州长城科工贸有限公司)。 ??? SOD测定试剂盒、MDA测定试剂盒购于南京建成生物工程研究所，淀粉酶、糖化酶购于诺维信(Novozymes)公司，乙醇、乙醚、丙酮等均为国产分析纯。 ??? 2.2玛咖多糖的提取方法 ??? 称取玛咖根干燥粉末，按1：25(w／w)加入水溶剂，超声波功率200W，提取时间20min，提取温度50℃，低速离心，残渣重复提取1次，提取液浓缩，加入淀粉酶除淀粉。调节pH 6．0，用糖化酶彻底酶解淀粉酶解物，60℃下维持4h。煮沸10rain灭酶，离心去沉淀。上清液中缓慢加入95％ 乙醇进行醇析，搅拌10rain，4℃冰箱中放置12h后得到土黄色沉淀，沉淀用Sevage法除蛋白质，多糖液再醇析1次，沉淀分别用乙醚、丙酮洗涤。真空干燥得到粗多糖粉末。玛咖多糖为棕褐色粉末，易溶于水，临用时用生理盐水配制。? ?? 2.3玛咖多糖对小鼠游泳时间的影响 ??? 2.3.1动物分组及给药?? ?? 取6O只雄性昆明小鼠，体重(20± 2)g，随机分为正常对照组、高、中、低剂量给药组。高、中、低剂量给药组分别按2．25g／kg’d、1．5g／kg ?d、0．75g／kg?d灌胃玛咖多糖，正常对照组以等体积生理盐水灌胃，连续灌胃10d后对小鼠进行负重游泳实验及血清指标测定。 ??? 2.3.2实验过