甘草多糖的提取及纯化.doc

甘草表面红棕色或灰棕色，具显著的纵皱纹、沟纹、皮孔及稀疏的细根痕。质坚实，断面略显纤维性，黄白色，粉性，形成层环明显，射线放射状，有的有裂隙。根茎呈圆柱形，表面有芽痕，断面中部有髓。栽培要点：喜阳光充沛，日照长，气温低的干燥气候。宜选土层深厚，排水良好的砂质壤土栽培。用种子或根茎繁殖，但以根茎繁殖生长快。药材特性：甘草，系豆科多年生草本植物。深秋，荚果裂开，籽粒随风散步大地上，天然繁殖。茎挺拔直立；根如圆柱，直径三四厘米，大的五六厘米，长一米多，最长者达三四米。具体用处：甘草是临床最常应用的药品。生甘草能清热解毒，润肺止咳，调和诸药性；炙甘草能补脾益气，临床用量特大，出口量大。除药用之外，食品上也大量用甘草做糕点添加剂，它的甜度是蔗糖的百倍。西方国家大量进口甘草，从中提取甘草次酸，治艾滋病。甘草退耕还林，水土保持作用更强。陕北农民和西部人们反映，把甘草种子随便撤到地上即可出苗，抗旱性特强。 83％～90％，占细菌的10％～30％，动物的小于2％。大量药理及临床研究证实：多糖有调节免疫、抗癌、抗肥胖、控制血糖、降胆固醇、降血脂等生理功能，可广泛应用于医药、保健品及功能食品，作为绿色生物医药产品具有广阔的市场前景［2］。 多糖又称多聚糖。其存在于动物、高等植物、微生物(细菌和真菌)及海藻等机体中。多糖具有复杂、多方面的生物活性和功能，可作为广谱免疫促进剂，具有免疫调节功能，如多糖能治疗风湿病、慢性病毒性肝炎、癌症等免疫系统疾病，甚至能抗AIDS病毒［3］；还具有抗感染、抗放射、抗凝血、降血糖、降血脂作用；促进核酸与蛋白质的生物合成作用；能控制细胞分裂和分化，调节细胞的生长与衰老，而且多糖作为药物其毒性极小，因而多糖的研究已引起人们的极大兴趣。尽管我国对多糖的研究起步较晚，但近十几年来的工作取得了较大的进展，愈来多的多糖被发现，并证实它们具有广泛的生物活性［4］。 多糖是自然界中含量最丰富的聚合物。长期以来,多糖类有效成分重视不够,在天然生物活性成分研究中往往当作杂质被除去。近20 年来,发现多糖具有抗肿瘤和提高免疫作用, 成为国内外研究的一个热点。 多糖具有多种生物活性, 是一种天然的功能性成分。它在食品中的应用十分广泛, 可以用于抑制脂类氧化和稳定酸性饮料中的蛋白质, 并可以作为食品中的乳化成分［5］。 多糖是水果中一类重要的功能因子，具有抗肿瘤［6］、抗疲劳［7］、抗损伤［8］、抗氧化［9 －1 0］，增强人体免疫力和抗癌的作用。国内外诸多文献对植物中多糖的分离纯化与结构分析进行了大量的研究，目前多糖的分离分析依然是比较活跃的研究领域［11］。 目前多糖产品开发相当热门，也卓有成效。多糖的生理功能与其纯度和化学结构有着重要的关系，多糖的提取纯化是其研究的基础。因此科学高效地从动植物及微生物中提取、纯化其中的多糖成分是目前的核心问题, 本实验则对甘草的提取与纯化进行探讨与研究，以获得较高提取率的甘草多糖，为甘草多糖的应用研究提供依据。 摘要 ：采用水提醇沉法提取甘草中的多糖,通过DEAE纤维素柱层析和SephadexG-100凝胶过滤柱层析分离纯化，用苯酚-硫酸法测甘草多糖的含量，再用薄层色谱法测多糖组分 关键词：甘草 多糖 提取 纯化 立论依据 1. 了解甘草多糖的提取与纯化方法 2．学会用苯酚-硫酸法测甘草多糖的含量 3. 掌握DEAE纤维素柱层析纯化方法和SephadexG-100凝胶过滤柱层析分离方法 4.学会用薄层色谱法测多糖组分 实施路线 1 实验材料与方法 1.1 实验材料与试剂 甘草 无水乙醇 苯酚 浓硫酸 氯仿 正丁醇 葡糖糖 丙酮 乙醚 蒸馏水 1.2 实验仪器 电子天平 破碎机 恒温水浴锅 高速台式离心机 旋转蒸发器 震荡培养箱 真空冷冻干燥机 透析袋 电导仪 紫外分光光度计 器皿： 16个250m l回流锥形瓶 16个100ml烧杯 4个玻璃棒 6支100ml离心管 2个1000ml烧杯 保鲜膜 10个培养皿 细线 1ml移液管 2ml移液管 5ml移液管 10ml移液管 100ml 量筒 500ml量筒 2 实验方法 2.1 提取工艺 称取定量 干的甘草→破碎→热水浸提(83℃,料液比1:10,2h) →加等体积sevage试剂（氯仿：正丁醇4:1）混合震荡(30min)→离心分离上清液（4℃,5000r,10min）→浓缩（至原体积1/3）→体积比为72%的95%乙醇沉淀→静置过夜(24h)→离心(4℃,5000r,10min)→沉淀物→无水乙醇、丙酮、乙醚依次洗涤→真空冷冻干燥得啤特果粗多糖（24h） 2.2