生化技术实习报告.doc

实 习 报 告 实习名称 系 别 年级专业 学生姓名 指导老师 一、实习时间、地点、单位 1、实习时间： 2、地点和实习单位 二、实习过程概述 （一）实习工作准备 1. 时间：1天 2. 内容： （1）熟悉实验方案，认真预习仪器的使用。 （2）分组和准备所需的仪器。 （二）山茱萸有效成分熊果酸的超临界CO2萃取 1. 时间：4天 2. 内容： （1）模拟操作二氧化碳超临界萃取装置。 （2）烘干、粉碎山茱萸。 （3）萃取。 （三）加携带剂超临界CO2萃取山茱萸有效成分熊果酸 1. 时间：4天 2. 内容： （1）模拟操作二氧化碳超临界萃取装置。 （2）烘干、粉碎山茱萸。 （3）加携带剂萃取。 （四）HPLC法测定萃取物中有效成分熊果酸的含量 1. 时间：1天 2. 内容： （1）处理萃取物。 （2）用HPLC定性和定量分析有效成分。 （五）书写实习报告 时间：1天 三、主要实习岗位和实习内容 （一）实习目的 掌握超临界CO2萃取的原理； 掌握超临界CO2萃取的操作； 掌握材料的处理与准备； 掌握携带剂对萃取结果的影响； 掌握加携带剂CO2超临界萃取的操作； 掌握高效液相色谱（HPLC）的原理和操作； 掌握用高效液相色谱定性和定量分析有效成分。 （二）实习内容 oC烤箱中烘烤3~4小时至完全干燥为止。用粉碎机粉碎（过40目筛），粗粉要再次粉碎，直到能过40目筛。 2、萃取 称取100 g 粉碎的山茱萸装入萃取缸并把萃取缸安装好，在压力为30MPa、温度为40oC下萃取3~4小时。并按CO2超临界萃取装置使用说明书（见附页）开机进行萃取操作：（注意：一定要在熟练掌握原理和操作规则情况下才正式开机操作。） 3、收集萃取物 在收集萃取物之前，应准备4个洗干净并烘干的250ml 锥形瓶。每萃取1个小时收集一次，具体操作按说明书。最后收集完后，用封口膜封好锥形瓶，贴好标签并标好组号，时间等。保存好以备后面实验。 4、记录 应认真记好实验数据，包括实验的条件（如萃取温度、压力、萃取时间等），实验结果和实验现象等。 5、仪器清理 做完实验后，应依次用自来水，蒸馏水和无水乙醇清洗萃取缸和分离缸。清理打扫实验现场，包括实验台卫生，实验室卫生。特别提醒注意关掉萃取装置总电源。 3.3加携带剂超临界CO2萃取山茱萸有效成分熊果酸 1、材料的准备 选择好山茱萸材料，把其中的杂质去掉，称取1公斤山茱萸在70~1000C烤箱中烘烤3~4小时至完全干燥为止。用粉碎机粉碎（过40目筛），粗粉要再次粉碎，直到能过40目筛。 2、加携带剂萃取 称取100 g 粉碎的山茱萸装入萃取缸并把萃取缸安装好，在压力为30MPa、温度为400C下、按说明书操作加入100ml无水乙醇携带剂。并按CO2超临界萃取装置使用说明书（见附页）开机进行萃取操作，萃取3~4小时。（注意：一定要在熟练掌握原理和操作规则情况下才正式开机操作。） 3、收集萃取物 在收集萃取物之前，应准备4个洗干净并烘干的250ml 锥形瓶。每萃取1个小时收集一次，具体操作按说明书。最后收集完后，用封口膜封好锥形瓶，贴好标签并标好组号，时间等。要保存好以备后面实验。 4、记录 应认真记好实验数据，包括实验的条件（如萃取温度、压力、萃取时间和加入携带剂的种类和数量等），实验结果和实验现象等。 5、仪器清理 做完实验后，应依次用自来水，蒸馏水和无水乙醇清洗萃取缸和分离缸。清理打扫实验现场，包括实验台卫生，实验室卫生。特别提醒注意关掉萃取装置总电源。 3.4HPLC法测定萃取物中有效成分熊果酸的含量 1、标准样器的配制 用电子天平精确称取熊果酸标准样品1.5mg置于2mlEP管中，用移液器精确量取1ml无水甲醇（色谱纯）加入EP管中，使熊果酸充分溶解于甲醇中，即得1.5mg/ml的标准液。 2、样品的制备 将前面得到的超临界CO2萃取物分别先用色谱纯甲醇充分溶解，再定容至50ml、过滤，取滤液2ml置于2ml离心管中，离心5min（10000r/min），取上清液放于2ml离心管中用于HPLC定性定量分析。 3、上样层析 色谱条件：色谱柱YWG-C18（250mm×4.5mm, 10μm）μl；柱温，室温。准备好HPLC装置，分别用标样和样品层析，采集数