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电泳的定义及分离原理电渗流、双电层定义与电泳的区别 电泳：是指带电粒子在电场中向与其自身带相反电荷的电极移动的现象。 原理电泳技术就是利用在电场作用下，由于待分离样品中各种分子带电性质以及分子本身大小、性状等性质的差异，使带电分子产生不同的迁移速度，从而对样品进行分离、鉴定或提纯。 迁移率与带电分子所带净电荷成正比，与分子的大小和缓冲液的黏度成反比。 (electroosmotic flow, EOF)是指在毛细管中，体相溶液在轴向直流电场的作用下发生的定向运动。 任何两个不同的物相接触都会在两相间产生电势，这是因电荷分离引起的。两相各有过剩的电荷，电量相等，正负号相反，相与吸引，形成双电层。电泳淌度的定义及影响因子 电泳淌度 (Electrophoretic Mobility)是单位场强下离子的平均电泳速度。因为电泳速度与外加电场强度有关，所以，在电泳中常用淌度而不用速度来描述荷电离子的电泳行为和特性。 带电粒子的电泳淌度在一定条件下取决于粒子本身的性质，即与其所带电量成正比；与其半径及介质粘度成反比。 区带电泳（CZE）分离硝基酚位置异构体的分离原理、运用CZE分离硝基苯酚异构体 随着迁移速度不同，逐渐形成样品谱带，依次在检测窗口被检测 硝基苯酚的电离 等速电泳的分离原理及特点 等速现象：电泳静态达到后，被分离的离子淌度按顺序性梯形递减。 1. 将两种淌度差别很大的缓冲液分别作为前导离子(充满毛细管)和尾随离子（置于一端的电泳槽中），试样离子的淌度全部位于两者之间，并以同一速度移动。 2. 前导电解质的迁移率高于任何样品组分，后者则低于任何样品组分，被分离的组分按其不同的迁移率夹在中间，在强电场的作用下，各被分离组分在前导电解质与尾随电解质之间的空隙中移动，实现分离。 特点：界面明显，富集、浓缩 醋酸纤维素薄膜电泳的分离原理及操作流程 聚丙烯酰胺凝胶电泳的分离原理、涉及的聚合反应及特点 原理涉及的聚合反应及特点 不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳的分离原理、存在的物理效应及特点 分离原理 SDS的分离原理 琼脂糖凝胶电泳的优缺点及在分离血清乳蛋白中的应用 等电聚焦电泳的定义、分离原理及pH梯度的形成 等电聚焦电泳（IFE，isoelectric focusing electrophoresis）原理 ： 利用特殊的一种缓冲液（两性电解质）在凝胶（常用聚丙烯酰胺凝胶）内制造一个pH梯度，电泳时每种蛋白质就将迁移到等于其等电点（pI）的pH处（此时此蛋白质不再带有净的正或负电荷），最后，样品的各组分在各自的等电点聚焦成一条清晰而稳定的窄带。 Pr为两性电解质，不同Pr的pI不同，pI范围窄且净电荷为零，因此依pI分离Pr。 EF是在凝胶中加两性载体电解质，通直流电后，可形成从阳极到阴极逐步增加的pH梯度(连续的,稳定的,线性的pH)。 当Pr在电场中迁移到它的PI时，由于净电荷为零，不再移动。如扩散，附近的凝胶会使其荷电阳、阴极会重新吸引它回到pI位置。因此Pr只能在pI位置被浓缩成窄、稳定的带。称这种浓缩效应为聚焦。 只要凝胶中的pH梯度范围足够窄。便可将pI相近的Pr分开，EF是电泳技术中分辨率最高的技术。 pH梯度的建立 产生pH梯度的方法通常有两种： 一种是用两种不同pH的缓冲液互相扩散，在混合区形成pH梯度，称为人工pH梯度。但这种pH梯度不很稳定，常用于制备电泳。 另一种是利用两性电解质载体（Carrier ampholytes）在电场的作用下自然形成pH梯度，称为天然pH梯度。 （1）制胶 （2）溶液配制（3）灌胶和取胶（4）等电聚焦（5）pH梯度测定（6）固定、染色、脱色（7）保存 双向凝胶电泳的分离原理及特点 第一向采用等电聚焦 根据复杂的蛋白质成分中各个蛋白质的PI的不同，将蛋白质进行分离。 第二向采用了十二烷基硫酸钠一聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS）就是按蛋白质分子量的大小使其在垂直方向进行分离。其结果不再是条带状，而是呈现为斑点状。 Southern blotting、Northern blotting、Western blotting的定义及操作流程 操作流程脉冲场凝胶电泳、单细胞凝胶电泳、变性梯度凝胶电泳各自的适用范围 脉冲场凝胶电泳单细胞凝胶电泳技术( single cell gel electrophoresisassay，SCGE) 又称彗星试验(Comet assay)，是一种快速、灵敏、简便、价廉、重复性好的检测单细胞DNA 损伤的方法。 HPCE的定义、主要仪器及特点 HPCE中检测的方法（紫外与荧光）