生物技术综合实验指导手册.doc

生物技术综合实验 实验指导 适用专业：生物技术 鲁东大学生命科学学院 编写：应用生物工程教研室 2010年 目 录 第一部分、综合性实验 4 综合项目一、α-淀粉酶产生菌的分离与筛选 4 实验一、培养基配制及样品采集 4 实验二、样品处理及初筛 5 实验三、α-淀粉酶产生菌的分离与筛选 6 综合项目二、酵母菌的诱变育种 8 实验四、培养基配制和菌种活化 8 实验五、酵母菌的诱变处理 9 实验六、呼吸缺陷型菌株的初筛 10 实验七、呼吸缺陷型酵母菌的验证 11 综合项目三、谷氨酸发酵及提取工艺 12 实验八、谷氨酸菌种的制备 12 实验九、谷氨酸的中糖发酵及控制 13 实验十、发酵液中谷氨酸的回收及精制 15 综合项目四、红曲发酵及红曲色素的提取 17 实验十一、红曲液体菌种的制备 17 实验十二、红曲固体发酵 18 实验十三、红曲色素的提取及色价测定 19 综合项目五、糖化酶的发酵和提取………………………………………………….22 实验十四、培养基的配制和菌种活化 实验十五、糖化酶的摇瓶发酵 实验十六、糖化酶的提取、浓缩、活性测定 第二部分：设计性实验 25 设计性实验要求 25 设计项目一、摇瓶发酵法生产柠檬酸 26 设计项目二、 固体发酵法生产柠檬酸 29 设计项目三、α-淀粉酶生产 32 设计项目四、酵母细胞的固定化 33 第三部分 附录 36 附录一、中试发酵设备的使用方法 36 附录二、气升式生化反应器的使用 38 附录三、发酵液中还原糖的测定方法 40 附录四、谷氨酸浓度测定法 42 附录五、α-淀粉酶的测定方法 43 附录六、糖化型淀粉酶活力的测定 45 附录七、柠檬酸的检测…………………………………………………………… 48 附录八 原料中粗淀粉的测定…………………………………………………… ..49 实 验 守 则 一、实验 实验前认真做好课本有关章节的阅读及实验讲义的预习，简单了解实验装置的构造，掌握有关测量仪表的使用方法，确定实验方法和步骤，做好实验原始数据的记录。 指导教师在实验前进行提问，如发现没有达到预习要求的同学，有权停止其参加当次实验。 操作过程应在装置指定范围内进行调节，注意观察实验现象，正确读取实记录。 注意节约水电、药品、物品、爱护仪器设备，实验结束，将设备、仪器整理复原，场地清扫，与实验无关的装置仪器不得挪用。 实验室内保持安静，不得高声谈笑、喧闹，违者按破坏课堂纪律处理，实验结束后，所测数据经指导教师许可，方可离开。 二、实验报告 实验报告内容包括：实验原理、流程简图、操作要点、数据图表（附原始记录、计算示例）主要结论，实验结果的分析。 实验报告写在报告纸上，三天内交给指导教师。 三、注意事项 不碰摸与本实验无关的电源开关、电气设备、仪器。 仪器设备转动前，注意其周围是否有阻碍物，若发热或声音不正常，应及时停车检查。 注意防止高压容器泄露和蒸汽管道烫伤事故的发生。 第一部分、综合性实验 综合项目一、α-淀粉酶产生菌的分离与筛选 实验一、培养基配制及样品采集 一、实验目的 学习和掌握菌种选育技术中从自然界中采样的技术，掌握α-淀粉酶筛选的特异性培养基配制方法。 二、实验原理 自然界含菌样品极其丰富，土壤、水、空气、枯枝烂叶、植物病株、烂水果等都含有众多微生物，种类数量十分可观。但总体来讲土壤样品的含菌量最多土壤由于具备了微生物所需的营养、空气和水分，是微生物最集中的地方。从土壤中几乎可以分离到任何所需的菌株，空气、水中的微生物也都来源于土壤，所以土壤样品往往是首选的采集目标。但各种微生物由于生理特性不同，在土壤中的分布也随着地理条件、养分、水分、土质、季节而有很大的变化。因此，在分离菌株前要根据分离筛选的目的，到相应的环境和地区去采集样品。用取样铲，将表层5cm左右的浮土除去，取5～25cm处的土样10～25，装入事先准备好的塑料袋内扎好。北方干燥土壤，可在10～30cm处取样。给塑料袋编号并记录地点、土壤质地、植被名称、时间及其他环境条件。一般样品取回后应马上分离，以免微生物死亡。一般耕作土、菜园土和近郊土壤中有机质含量丰富，营养充足，且土壤成团粒结构，通气饱水性能好，因而，微生物生长旺盛，数量多，尤其适合于细菌、放线菌生长。山坡上的森林土，植被厚，枯枝落叶多，有机质丰富，且阴暗潮湿，适合霉菌、酵母菌生长繁殖，微生物数量相应也比较少。从土层的纵剖面看，1～5cm的表层土由于阳光照射，蒸发量大，水分少，且有紫外线的杀菌作用，因而微生物数量比5～25cm土层少；25cm以下土层则因土质紧密，空气量不足，养分与水分缺乏，含菌