生物药物分析重点原稿.docx

生物药物：生物药物指的是生物体生命活动过程中产生的，或通关过生物技术加工的，用做疾病的诊断、预防、治疗的初级和次级代谢产物，包括微生物药物、基因工程药物、动植物细胞组织制备的生化药物。 生物药物的分类：1、生化药物：如氨基酸、蛋白质、核酸、糖、脂等类。 2、微生物药物：如抗生素、酶抑制剂等。 3、生物技术药物：（1）DNA重组药物：如细胞因子干扰素类、细胞因子白介素类等。（2）基因药物：以基因物质为治疗剂，如反义药物、基因治疗、基因疫苗等。 4、半合成、合成药物：如PEG-EFO、小肽类等。 生物药物的特点：1、医疗应用方面：药理活性高，正对性强、副作用小、毒性低。 2、结构性质方面：不稳定。3、制造和质量控制方面：各环节严格控制，工艺设计与质量标准的制定与化学药物有较多区别。 酶法分析是利用酶作为工具对特定物质（底物、辅酶、抑制剂和激动剂等）进行定量分析的方法。 终点法测定原理：先借助酶反应（单个酶反应或者几种酶构成的偶联酶反应）使被测物质定量地进行转变，然后在转变完成后，测定底物、产物或辅酶物质（第二底物）等的变化量，因此称为终点测定法。终点法是酶法分析中最普遍，最广泛的定量法。 终点法的条件：1、必须有专一地作用该被测物质的酶，并能得到它的制品。2、能够确定使这种酶反应接近进行完全的条件。3、反应中底物的减少或产物的增加或辅酶物质的改变等可以借助某种简单的方法进行测定。4、在能满足这些条件的情况下，最好是采用单一酶反应就能进行定量检测。 使用终点法应注意的问题：1、酶的底物专一性：对于酶法分析来说，最理想的酶是具有绝对专一性的酶。2、反应的平衡：对于终点法来说，要求反应接近进行完全，故对不同的酶反应须采取不同的措施使反应进行到接近完全。(1)若酶反应平衡十分偏向进行方向，则可方便的用终点法进行检测，不需进行任何处理。(2)若反应的平衡并不十分偏向进行方向，或偏向逆方向，那么由于反应不能完全，因而也就不能正常定量。为了解决这一问题，通常采取以下一些措施：a、对于双底物反应尽可能提高第二底物的浓度；b、对氧化还原之类与H＋有关的反应要选择适当的pH；c、设法除去产物；d、用具有不同平衡常数的辅酶类似物代替原有的辅酶；e、和第二底物的再生系统偶联，则第一底物可能完全转化为反应产物3、反应液中的酶量：对于一个具体的测定来说不同的酶反应有不同的Km值，通过米氏方程和均相溶液反应的动力学推算和分析，可以大致得到如下的结论：a、对于单酶反应的酶法分析：所加入的酶量（u/ml）相当于Km（mmol）b、对于偶联反应的酶法分析，所加入的酶量如下：第一反应为酶量（u/ml）相当于Km1（mmol）; 第二反应为酶量（u/ml）相当于（1～2）×Km2（mmol）。4、反应产物抑制：若产物对反应本身有抑制作用，则就会妨碍反应进行，在这种情况下可采取将该产物除去或者和再生系统偶联的办法解决。 终点法种类：（1）单酶反应定量法：底物减少量的测定、产物增加量的测定、辅酶变化量的测定。（2）和指示酶反应偶联的定量法：以脱氢酶为指示剂、以脱氢酶以外的酶作指示剂。 辅酶变化量的测定： 条件：测定以NAD或NADP为辅酶的脱氢酶的底物的量，此法适用范围很广。原理：NADH和NADPH在340nm有特征最大吸收峰，而NAD和NADP在340nm却无这一吸收带，故可应用于NAD或NADP为辅酶的脱氢酶反应，通过测340nm吸光度的变化，就可以对作用相应脱氢酶底物的物质进行定量分析。 酶循环放大法：原理及步骤：酶循环具有化学放大作用，理论上可无限放大其灵敏度。酶循环放大分析法是利用酶循环所设计的一种超微分分析法。目前可准确定量10-15～10-18mol/L的生化物质。本分析法的三个步骤：1、转换反应：以试样中的待测组分为底物，经特异反应生成与待测组分相当的定量循环底物。2、循环反应：生成的循环底物反复参加由两个酶反应组成的偶联反应，所得产物量为循环产物的若干倍。3、指示反应：采用酶法测定反应产物。由酶法测定反应产物量及循环次数，计算出循环底物量，再推算出试样中待测组分的量。使用本法注意的问题：1、在进行循环反应之前，必须设法除去转换反应中剩余的辅酶，在超微量前列腺素定量分析的例子中就是设法除去NAD+。除去的方式：NAD和NADP的氧化型和还原型在不同的pH值下其稳定性不同，可通过调节pH来达到目的。2、在循环反应中，底物（不是辅酶）需够量。3、要用已知量的循环底物平行做循环反应和指示反应以求得循环数n。 酶联免疫吸附试验（ELISA）：基本原理：结合在固相载体上的抗原（抗体）与待检抗体（抗原）酶偶联物（标记物）反应后，催化水解或氧化还原酶的相应底物呈色，其颜色深浅与待测 抗原（抗体）含量成正比。技术要点：1、加样：即加标本、酶结合物和底物，注意交叉污染和产生