甲醛降解细菌的分离鉴定和降解效果测定.doc

甲醛降鉴定1 金志华1 李宁慧1 金飞玲1 黄翔和２ (1浙江大学宁波理工学院生物与化学工程分院，宁波 315100 2浙江省诸暨市教育局，诸暨 311800) 摘要：从活性污泥中分离纯化得到一株能降解甲醛的革兰氏阳性菌提取并纯化其基因组DNA，通过PCR扩增菌株的16SrDNA，μL/mL的甲醛的培养基上培养该菌36h后，甲醛降解去除率达到％以上关键词： 甲醛；鉴定；16S rDNA；PCRBiotechnology and Chemical Engineering Department of Ningbo Institute of Technology Zhejiang University, Ningbo 315100；2 Department of Education of Zhuji Zhejiang ) Abstract: A Gram positive bacteria strain that degrades formaldehyde was isolated from activated sludge of wastewater treatment plant from a chemical corporation.. The strain was observed through structure and physiological and biochemical characteristics. Molecule identification methods including distilled DNA, PCR amplification, Production Sequence showed that it was similar to Bacillus and 16SrDNA sequence shared 100% homology with that of Bacillus thuringiensis. Formaldehyde (1.2μL/mL) was degraded above 72% with 36 h by this strain. Key words: Formaldehyde；Isolation and Identification；16S rDNA；PCR 甲醛（HCHO）又名蚁醛，具有强烈的致癌和促癌作用。大量文献记载，甲醛对人体健康的影响主要表现在嗅觉异常、刺激、过敏、肺功能异常、肝功能异常和免疫功能异常等方面。被世界卫生组织确定为致癌和致畸形物质。 目前，治理甲醛污染的方法主要有化学反应方法、物理吸附技术、臭氧负离子技术、纳米光催化技术、低温等离子技术、植物净化和生物降解等方法。但化学反应法大量反复使用会造成新的二次污染；物理吸附法需要动力，能耗大；臭氧氧化法对无机物无效，有副产物，臭氧浓度太高时对人体有害；纳米光催化法效率较低、性能不稳定；低温等离子法耗电量大而且作用时间较短，需要不定期进行处理；植物净化法摆放过多，夜间使房内的二氧化碳浓度过高，影响健康。生物法降解甲醛具有降解效果好、投资费用低、占地面积小、工艺流程简单、无二次污染等优点而迅速成为国内外研究的热点。本文所研究的是从活性污泥中分离得到一株能降解甲醛的微生物（1）试剂及试剂盒草酸铵结晶紫染液卢氏碘液、番红复染液、孔雀绿染液、番红染液、1％结晶紫染液、20%硫酸铜水溶液、硝酸银鞭毛染色液、甲基红试剂、吲哚试剂、PCR产物纯化试剂盒 （）16S rDNA 基因的扩增用试剂10×buffer (including Mg2+)、dNTP、PCR引物正向引物Pf : 5′-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3′反向引物Pr : 5′-ACGGCTACCTTGTTACGACT-3′Taq Plus DNA Polymerase （）培养基和溶液 Ⅰ、 LB培养基：胰化蛋白胨10g、10g、酵母提取物50g、1000mL、pH7.0 Ⅱ、MS培养基：MgSO4 0.1g CaCl2.2H2O 0.02g KH2PO4 0.68g MnSO4.H2O 0.001 K2HPO4 1.73g FeSO4.7H2O 0.03g NH4NO4 1.0g， 1000mL。 Ⅲ、DNA提取所用溶液20％SDS溶液TE缓冲液10mmol/L Tris-HCl；1mmol/LEDTA，pH8.05mol/L NaClO4、氯仿－异戊醇V/V 24：1 Ⅳ、琼脂糖凝胶电泳溴酚蓝蔗糖溶液Ⅰ、取活性污泥悬浮液10ml于LB培养基中，在30℃、150r/min的摇床上培养16～24h后，吸取10ml富集液于装有100ml MS培养基的250ml三角摇瓶中，并加入80μL浓度为37%～40％甲醛），最后将三角