甲钴胺片含量测定方法学研究.doc

甲钴胺片的含量测定检测方法研究 徐丽平 徐慧娟 杭州康恩贝制药有限公司 摘要 目的：建立甲钴胺片含量测定方法，为甲钴胺片质量标准相关检测项目提供检测方法和实验依据。方法：样品碾细，以流动相溶解，制备供试品溶液；色谱分析条件：色谱柱为Diamonsil 5u C18，250×4.6mm；流动相：乙腈-0.03mol/L磷酸二氢钠（磷酸调pH为3.5）（19:81）；流速1.0ml/min；检测波长：342nm。结果：甲钴胺线性关系良好，平均回收率100.7%。结论：本法测定结果准确，可用于甲钴胺的含量测定。 关键词：甲钴胺，高效液相色谱法 甲钴胺片活性成分甲钴胺，主要用于治疗周围神经病。由于甲钴胺对光敏感，故需包衣，包衣材料成分复杂，干扰大，现有的紫外分光光度法重现性差。本实验采用HPLC法测定甲钴胺的含量，结果准确，复现性好。 1 仪器及试药 高效液相色谱仪：安捷伦1100，VWD检测器，？？工作站；电子天平：？2100；超声波清洗器。 甲钴胺对照品，浙江省药品检验所标定，批号：？，含量：？；乙腈为色谱纯，磷酸二氢钠为分析纯；甲钴胺片为本公司生产，规格0.5mg。 2 色谱条件 色谱柱：Diamonsil 5u C18（250×4.6mm）；流动相：乙腈-0.03mol/L磷酸二氢钠（磷酸调pH为3.5）（19:81）；流速1.0ml/min；检测波长：342nm；柱温：常温；进样量：20μl。理论塔板数按甲钴胺峰计算不低于2000，甲钴胺与相邻杂质峰的分离度应符合要求。 溶液的制备 3.1对照品溶液 3.2供试品溶液 3.3空白溶液 系统适用性试验 取处方量的空白辅料，照含量测定法进行测定，空白辅料不干扰测定，结果见附图2-1（图谱：c:\HPCHEM\1\DATA\JGAFFX\00009） 线性考察 精密称取甲钴胺对照品（050602，含量98.2%，水分8.31%）11.33mg，置于200ml容量瓶中，加含量测定项下的流动相溶解并定容至刻度，摇匀，得贮备液（相当于甲钴胺浓度为51.01μg/ml），再精密量取储备液1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml、6.0ml、8.0ml分别置于10ml容量瓶中，用流动相定容至刻度，摇匀，照2.2项色谱条件，精密量取20μl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，计算回归方程，结果见表2-1，图2-1。 表2-1 溶出度测定标准曲线各浓度点峰面积 甲钴胺浓度（μg/ml） 峰面积A 图2-1 含量测定测定标准曲线 回归方程：y=16.268x－2.8548，R2＝1.0000 由上述结果表明，甲钴胺在流动相中，在5.10～51.01μg/ml浓度范围内，峰面积与浓度成良好线性关系。 精密度试验 取含量测定项下的供试品溶液，连续进样测定6次，结果见表2-3。 序号 1 2 3 4 5 6 峰面积（A） 221.4 221 221.5 221.6 221.8 222.2 X（A） 221.6 SD（%） 0.40 RSD（%） 0.18 重复性试验 取本品同一批号样品精密称取6份，照含量测定项下的方法进行测定，结果见表2-4。 序号 1 2 3 4 5 6 含量（%） 98.16 98.25 98.13 98.31 98.46 98.60 X（%） 98.32 SD（%） 0.18 RSD（%） 0.18 稳定性试验 精密量取上述同一份供试品溶液20μl，分别在0，2，4，6，12，h测定面积，甲钴胺的RSD为？？，杂质峰面积与初始峰面积相比，差异比较大，？？ 回收率测定 精密称取甲钴胺含量99.48%，水分11.1%）113.3mg，置50ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为储备液；取处方量的辅料，按处方量主药的80％、100％、120％三个不同梯度分别加入储备液（约相当于甲钴胺16、20、24μg），照本品含量测定项下的方法测定计算回收率，每个梯度做三份，结果见表2-2。由表可知，含量测定方法回收率良好。 表2-2 含量测定回收率试验 浓度梯度 加入量 （mg） 测得量 （mg） 回收率 （％） 平均回收率（％） RSD （％） 80％ 1 1.60 1.61 100.69 100.52 0.36 2 1.60 1.61 100.44 3 1.60 1.61 100.44 100％ 1 2.00 2.01 100.18 100.57 2 2.00 2.02 100.68 3 2.00 2.02 100.84 120％ 1 2.40 2.44 101.49 101.01 2 2.40 2.42 100.76 3 2.40 2.42 100.80 样品