第4章药物定量分析与分析方法验证.ppt

基本要求 第一节 概述 为什么要对定量分析的样品进行前处理？ 常规药物的主药，辅料 新剂型药物的脂质体结构，微球骨架 中药制剂的复杂组成 生物药物浓度低，含有蛋白质等内源性物质 减少干扰，提高灵敏度，专属性，准确度 二、不经有机破坏的分析方法 （一）直接测定法 例如葡萄糖酸锌在水中溶解，直接释放锌离子。 例如：富马酸亚铁 不溶于水，溶于热稀矿酸，释放亚铁离子，采用铈量法 ， 邻二氮菲作指示剂 （红色-蓝色） 有机破坏 金属原子，卤素与碳原子结合牢固者，用上述方法很难将有机结合的金属原子或者卤素转化为无机的金属化合物及卤素化合物，必须采用有机破坏的方法将药物分子破坏，将有机结合状态的金属，卤素等转变为可测定的无机化合物，方可选用合适的分析方法进行测定。 硫酸-硫酸盐法：常用于含砷或锑有机药物。硫酸钠为含水化合物，不利于有机破坏，采用硫酸钾。加入硫酸盐，提高硫酸沸点，破坏完全，防止分解。破坏得到的无机金属离子多为低价态！ 仪器：凯式烧瓶 取样：10g 生物样品：10-15ml 尿样：50ml 第二节 定量分析方法特点 练习与思考 在测定生物样品中药物及其代谢物时，一般要在测定前进行样品的前处理，即进行分离、纯化、浓集。生物样品包括各种体液和组织，常用是血液（血浆、血清、全血）、尿液、唾液。一般具有以下特点（1）样品量少，浓度低（2）干扰因素多（3）药物浓度随取样时间而变化，且个体差异较大。 （一）血样   血浆（plasma)和血清（serum)是最常用的生物样品。 测定血中药物浓度通常是指测定血浆或血清中的药物浓度，而不是指含有血细胞的全血中的药物浓度。 一般认为，当药物在体内达到稳定状态时，血浆中药物浓度与药物在作用点的浓度紧密相关，即血浆中的药物浓度反映了药物在体内（靶器官）的状况，因而血浆浓度可作为作用部位药物浓度的可靠指标。 1.取样： 供测定的血样应能代表整个血药浓度，因而应待药物在血液中分布均匀后取样。 动物实验时，可直接从动脉或心脏取血。 对于病人，通常采取静脉血，有时根据血药浓度和分析方法灵敏度。也可用毛细管采血。血样采量一般为1-2ml 2.制备： 血浆的制备 将采取的血液置含有抗凝剂（如：肝素、草酸盐等）的试管中，混合后，离心，分离血细胞，上清液即为血浆。 肝素是一种含硫酸盐的粘多糖，常用其钠盐、钾盐，它能阻止凝血酶原转化为凝血酶，从而抑制纤维蛋白原形成纤维蛋白。一般lml的全血需加0.1—0.2mg的肝素，加入血样后立即轻轻旋摇，但勿太猛烈，以免导致血细胞破裂。 血清的制备 血清是由血液中纤维蛋白原等影响下，室温放置，血液凝结，剥去血饼，离心后上层澄清黄色液体，经离心其量约为全血量的30％一50％。在室温高时，血凝过程进行得很快，宜在血凝后半小时内分离血清。当室温低时，血凝过程较慢，可将血液置37℃温度下加速血清析出。 血浆及血清中的药物浓度测定值通常是相同的。 全血也应加入抗凝剂混匀，防止凝血。对大多数药物来说血浆浓度与红细胞中的浓度成正比，所以测定全血也不能提供更多的数据。全血的净化较血浆和血清麻烦，特别是溶血后，血色素等可能会给测定带来影响。通常用血浆或者血清中药物药物浓度代替。 3.特点： 血样的采取量受到限制、间隔时间，采集方法：一般取1ml—2m1。用注射器、毛细管或微量采血管采取。血样的采血时间间隔应随测定目的的不同而异。 采取血样后，应及时分离血浆或血清，并立即进行分析。如不能立即测定时，应完全密塞后保存，短期冷藏（4℃），长期冷冻（-20℃）保存。 （二）唾液 唾液的采集应尽可能在刺激少的安静状态下进行。一般在漱口后15min收集，采集10min。 采集后立即测量其除去泡沫部分的体积。放置后分为泡沫部分、透明部分及灰乳白色沉淀部分三层。分层后离心分离，取上清液作为药物浓度测定的样品。 可集中、单一部位采集。 唾液中含有粘蛋白，为阻止粘蛋白的生成，应将唾液在4℃以下保存，解冻后搅匀后再用，否则会产生误差。 优点：可以不受时间和地点的限制，很容易地反复采集，采集时无痛苦无危险；有些唾液中药物浓度可以反映血浆中游离型药物浓度。 例如：HPLC法测定唾液中依诺沙星。 缺点： 唾液是各腺体分泌的的混合液体，其组成发生经时变动；因此，唾液中的药物浓度与血浆中的游离型药物浓度相比就容易变动； 唾液中药物浓度与血浆中药物浓度的比值(S/P)只有少数药物是恒定值； 有些与蛋白结合率较高的药物，