石蜡切片制备基本步骤(附HE染色步骤).doc

石蜡切片制备基本步骤 ?????????????????????????????????????? 一、准备工作 （一）洗涤实验所需器皿：（玻璃器皿的清洗） 1、? 用洗衣粉将玻璃器皿表里擦洗干净反复洗刷 ? 将器皿在自来水下冲洗干净 ? 将器皿倒扣在铺有吸水纸或纱布的桌子上控干 注：一般情况下，经以上步骤后，用蒸馏水洗过1~3次即可烘干备用，如果做特殊染色还需浸泡在酸性清洁液内12~24小时，再经自来水彻底冲洗，再用蒸馏水过洗1~3次 烘干备用。 清洁液（洗液）的配制： 成分 强酸液 次强酸液 弱酸液 浓硫酸（ml） 1000 200 100 重铬酸钾（mg） 63 120 100 蒸馏水 （ml） 200 200 1000 ? ? 重铬酸钾 1200g 蒸馏水 2000ml 将2000ml浓硫酸缓缓倒入上述溶液中，边倒边用木棒轻轻搅拌 1.??????? 将所需载玻片与盖玻片清洗后，放入硫酸重铬酸钾溶液中浸泡24小时 2.??????? 流水冲洗，再用蒸馏水冲洗3遍 3.??????? 95%~100%酒精浸泡24小时，用绸布擦干备用 注：在将载玻片与盖玻片放入清洁液中时，要一片片地投入，使其不致重叠。 （一）缓冲溶液： 1．磷酸盐缓冲液 A液：0.1mol/L磷酸二氢钠 B液：0.1mol/L磷酸氢二钠 A液与B液按比例混合调整到所需的PH值（3：） 2 A液：0.1mol/L枸椽酸 B液：0.1mol/L枸椽酸钠 A液与B液按比例混合调整到所需的PH值（6.2：） 1．甲醛：10%甲醛 福尔马林 100ml 蒸馏水 900ml 注：实际甲醛含量只有3.6~4.0%但习惯上都将其视为10%。 210％中性福尔马林钙固定液 甲醛液 10ml 蒸馏水 90ml 加碳酸钙至过饱和(以容器底部碳酸钙沉淀1~2cm厚为适度)充分振荡混合后，放置24小时取上清液使用。 34%多聚甲醛： 8%多聚甲醛 多聚甲醛 8g 蒸馏水 100ml 加温至60左右，不时搅拌，成为乳白色溶液。滴加1N NaOH，并不停搅动至液体清明。 1N NaOH lN等于1L溶液中某种物质1mol除以该物质的氢当量价所得数值的量 氧化钠(NaOH )；分子量＝40．005，当量价＝1 1N Na0H的配制方法为：m＝40．005／1＝40．005g。取40．005gNaOH溶解于1L蒸馏水中 4% 8%多聚甲醛 50ml 0.1M磷酸盐缓冲液 50ml PH7.2 先取50 ml 8%多聚甲醛，用0.1M磷酸二氢钠和0.1M磷酸氢二钠将PH值调至7.2 4Bouin液： 苦味酸饱和水溶液 75ml 36％~40％福尔马林液 25ml 冰醋酸 5m1 5Bouin氏固定液 苦味酸饱和水溶液 45ml 95%酒精 45ml 36％~40％福尔马林液 5ml 冰醋酸 5m1 6Carnoy液： 冰醋酸 10 m1 氯仿 30 m1 无水乙醇 60 m1 以上三者临用前混合，预冷至4后使用。24小时后固定液失效。 1．Harris苏木精液 A液： 苏木精 1g 无水酒精 10ml B液： 铵矾或钾矾 20g 蒸馏水 200ml 氧化汞 0.5ml 冰醋酸 8ml 将矾溶于水，加热溶解（B液），稍冷后将苏木精酒精液（A液）混入B液，加热，稍冷却，加氧化汞，再继续加热1分钟，染液变为紫色，注意在加氧化汞时宜逐渐少量加入，防止染液溅出。全冷后呈深紫色，将烧杯口用纱布盖好，隔夜过滤，在过滤液内每96 ml中加4 ml冰醋酸，放置1周后成熟，即可用于染色，保存期1~2个月。此染液在加醋酸后，对核染色特具选择性，故很适于脱落细胞的核染色。由于染液内已加有氧化剂，故不能长期储存，但利于配后即用。 2Mayer苏木精掖 苏木精 1g 钾矾或铵矾 50g 碘酸钠 0.2g 蒸馏水 1000ml 水合氯醛 50g 枸橼酸 1g 将苏木精，钾矾及碘酸钠依次加入水内，略加热并搅拌，此