脂质体制备方法.doc

微微脂體(又称脂质体)??? 微脂體起源於1960 年代中期，Bangham博士等人首先提出，在磷酸脂薄膜上加入含鹽分的水溶液後，再加以搖晃，會使脂質形成具有通透性的小球；1968年，Sessa 和Weissmann 等人正式將此小球狀的物體命名為微脂體（liposome）並做出明確的定義: 指出微脂體是由一到數層脂質雙層膜 (lipid bilayer) 所組成的微小的囊泡，有自行密合（self-closing）的特性。微脂體由脂雙層膜包裹水溶液形成，由於構造的特性，可同時作為厭水性（hydrophobic）及親水性（hydrophilic）藥品的載體，厭水性藥品可以嵌入脂雙層中，而親水性藥品則可包覆在微脂體內的水溶液層中。如同細胞膜，微脂體的脂質膜為脂雙層構造，由同時具有親水性端及厭水性端的脂質所構成，脂雙層由厭水性端相對向內而親水性端面向水溶液構成，組成中的兩性物質以磷酸脂質最為常見。微脂體的形成是兩性物質在水溶液中，依照熱力學原理，趨向最穩定的排列方式而自動形成。微脂體的性質深受組成脂質影響，脂質在水溶液的電性，決定微脂體是中性或帶有負電荷、正電荷。此外，磷酸脂碳鏈部分的長短，不飽和鍵數目，會決定微脂體的臨界溫度 (transition temperature, Tc)，影響膜的緊密度。一般來說，碳鏈長度越長臨界溫度越高，雙鍵數越多則臨界溫度越低，常見的DPPC(dipalmitoylphosphatidylcholine)与DSPC(distearoylphosphatidylcholine)的臨界溫度分別是42與56，而 Egg PC(egg phosphatidylcholine)與POPC(palmitoyl oleoyl phosphatidylcholine)的 Tc 則低於0。臨界溫度影響微脂體包裹及結合藥物的緊密度，當外界溫度高於Tc時，對膜有通透性的藥物，較容易通過膜；此外，當外界溫度處於臨界溫度時，微脂體脂質雙層膜中的脂質，會因為流動性不一致而使微脂體表面產生裂縫，造成內部藥物的釋出。在磷脂質內加入膽固醇，會對微脂體性質產生下列影響：增加微脂體在血液中的安定性，較不易發生破裂；減少水溶性分子對微脂體脂膜的通透性；增加微脂體的安定性，使其在血液循環中存在的時間較長。??? 微脂體可依脂雙層的層數或是粒子大小，加以命名或分類：??? (1) Multilamellar vesicle（MLV）是具有多層脂雙層之微脂體，粒子大小介於 100-1000 nm，特色是粒子內具多層脂質膜，一般而言，乾燥後的脂質薄膜，直接水合後，即形成 MLV，體積通常較為龐大，脂質含量較高。MLV 的脂雙層數，一般在五層以上；小於五層的 MLV 又稱為 oligo-lamellar liposomes 或 paucilamellar vesicle。?? (2) Large Unilamellar Vesicle ( LUV) 則是單層脂雙層所構成的微脂體，一般指1000 nm 等級 (250-2500 nm 或更大)的微脂體，動物細胞便是一種 LUV。?? (3) Intermediate-sized Unilamellar Vesicle (IUV) 也是單層脂雙層所構成的微脂體，一般指100 nm 等級 (25-250 nm)的微脂體。不過，目前一般文獻已經很少使用 IUV，而是將它併入 SUV 中。?? (4) Small Unilamellar Vesicle (SUV）是單層脂雙層所構成的小微脂體，早期的分類指特定磷酸脂所能夠成的最小微脂體(一般以超音波震盪製成)。如egg PC 以生理食鹽水 (normal saline) 水合的 SUV 是 15 nm； DPPC 則是 25 nm。?? 製備微脂體最傳統的方法是薄膜搖振法。如今已經發展出非常多種製備微脂體的方法，包括：?? 1.) 薄膜搖振法（Thin film method; Hand-shaking method）：又稱做Bangham’s method，將脂質以有機溶劑如氯仿（chloroform）、甲醇（methanol）及乙醇（ethanol）等溶解，均勻混合後，利用旋轉真空乾燥機 (rotary evaporator) 使圓底瓶內的溶劑揮發之後，即可在瓶壁上形成均勻的脂質膜，在臨界溫度以上的溫度條件下，將欲包覆物質的水溶液和脂質膜混合，用手左右搖動，將瓶壁上的脂質膜振下來，脂質在水溶液中即會自動形成MLV。?? 2.) 冷凍-再解凍 (freez-thaw)、均質(homogenization)及超音波震盪法（sonication method）：利用微脂體破裂後會再自行密合的特性，以機械性的力量均質或超音波震盪的方式，或者多次冷