芪归通络口服液制备工艺研究.doc

芪归通络口服液制备工艺研究 1 仪器与材料 1.1 仪器 Agilent 1100型高效液相色谱仪（美国Agilent公司）、CS电子计数器（北京宇权电子衡器有限公司）、LXF-ⅡB型低速大容量多管离心机（上海安亭科学仪器厂）、HWS-26型电热恒温水浴锅（上海一恒科技有限公司）、DH6-9203型电热恒温鼓风干燥箱（上海精密实验设备有限公司）、PHB-3便携式PH计（上海三信仪表厂）、R-201旋转蒸发仪（郑州长城科工贸有限公司）、SHB-ⅢA循环水式多用真空泵（郑州长城科工贸有限公司）。 1.2 材料 黄芪、当归、赤芍等药材（由广东省第二中医院药剂科提供）、芍药苷对照品（购于中国药品生物制品检定所，批号：110736-200630）、甜菊素（湖南省津市市甜菊糖有限公司）、HPLC用试剂为色谱纯、其它试剂均为分析纯。 2 提取工艺考察 本工艺针对处方中药物的性质和现代药理学研究进展，采用加水煎煮提取工艺，保持了原方汤剂用药的特点。水煎煮提取工艺过程中，影响提取效果的主要因素有加水量、浸泡时间、提取时间和提取次数等。本试验以干膏收率和有效成分芍药苷的提取率为考察指标，针对上述因素的影响进行重点研究，确定了一个较为合理的工艺路线，结果如下： 2.1 样品的处理 取1/3处方量药材，按实验设计的方法进行提取，过滤，滤液减压浓缩，定容至250mL，备用。 2.2 70%醇浸出物量的测定 取各正交试验号浓缩液20mL，加乙醇至含醇量为70%，静置过夜，取上清液于干燥蒸发皿中水浴蒸干，105℃烘箱干燥至恒重，取出，干燥器中放冷，精密称重，即得。 干膏得率（%）=×100% W为20mL浓缩液中干浸膏重量，V为定容体积，Wt为药材重量。 2.3 芍药苷含量测定 照高效液相色谱法（《中国药典》2005年版一部附录Ⅵ D）测定。 2.3.1 色谱条件 色谱柱:phenomenex C18柱(4.6×250mm，5μm)；流动相：甲醇-0.05mol/L磷酸二氢钾溶液（34.5：65.5）；检测波长：230nm；流速：1mL/min；柱温：30℃。 2.3.2 对照品溶液的制备 精密称取芍药苷对照品21.36mg置50mL容量瓶中，加水使溶解并稀释至刻度，精密吸取5.0mL，置25mL量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得（每1mL含芍药苷85.44μg）。 2.3.3 供试品溶液的制备 精密吸取样品溶液5mL，加于聚酰胺柱（30～60目，3g）上，用水洗脱，准确收集洗脱液50mL，摇匀，精密吸取10mL，置25mL量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得。 2.3.4 阴性样品溶液的制备 为了考察芍药苷含量测定有无干扰，需制备阴性样品。称取除赤芍外的药材加8倍量水，煎煮2次，60min/次，药液滤过，合并滤液，浓缩并定容至250mL，取5mL浓缩液，自供试品溶液的制备项下“取样品溶液5mL”起同法操作，制得阴性样品溶液。 2.3.5 标准曲线的绘制 精密量取芍药苷对照品溶液1，2，4，8，12，16μL进样，记录色谱图，见附图2。测定其峰面积，以芍药苷的进样量为横坐标，峰面积为纵坐标绘制标准曲线图（见下图1），得回归方程：Y=1134.23X+13.94，r=0.9999。结果表明：在0.085～1.367μg范围内，芍药苷峰面积与进样量呈良好的线性关系。 图1 芍药苷的标准曲线 2.3.6 阴性干扰的判断 吸取上述对照品、供试品及阴性对照溶液各10μL，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，见附图3。结果显示，阴性对照图谱与对照品、供试品图谱中芍药苷相应的保留时间无其他峰干扰，表明选择性良好，阴性无干扰。 2.3.7 样品含量测定 精密吸取各正交实验供试品溶液各10μL进样，记录色谱图，见附图4。根据供试品吸收度积分值与对照品积分值，外标两点法计算，即得。 2.4 吸水率的考察 称取1/3处方量的药材3份，分别加倍量的水浸泡，滤过，量取滤液体积，计算药材吸水率吸水率为%。，单因素实验，选取（），提取时间（），作为考察因素，以提取率为考察指标，，因素水平见表，实验方案及结果见表。水平 A（） B C提取时间（） 1 6 1 40 2 9 2 80 3 12 3 120 表4 水提工艺正交试验安排及结果 实验号 因素 评价指标 综合评分 A B C D 芍药苷（%） 得膏率（%） 1 1 1 1 1 60.65 19.81 67.61 2 1 2 2 2 65.29 24.63 77.30 3 1 3 3 3 79.48 29.05 92.83 4 2 1 2 3 52.13 20.53 62.91 5 2 2 3 1 77.16 28.52 90.56 6 2 3 1 2 89.81