药典2010_微生物限度检查法.doc

微生物限度检查法 微生物限度检查法系检查非规定灭菌制剂及其原料、辅料受微生物污染程度的方法。检查项目包括细菌数、霉菌数、酵母菌数及控制菌检查。 微生物限度检查应在环境洁净度10000 级下的局部洁净度100 级的单向流空气区域内进行。检验全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染，防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。单向流空气区域、工作台面及环境应定期按《医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》 的现行国家标准进行洁净度验证。 供试品检查时．如果使用了表面活性剂、中和剂或灭活剂，应证明其有效性及对微生物无毒性。 除另有规定外，本检查法中细菌及控制菌培养温度为30～35 ℃ ；霉菌、酵母菌培养温度为23～28 ℃ 。 检验结果以1g 、lml 、10g 、l0ml 或10cm2 为单位报告，特殊品种可以最小包装单位报告。 检验量 检验量即一次试验所用的供试品量（g 、ml 或cm2）。 除另有规定外，一般供试品的检验量为10g 或10ml；膜剂为100 cm2；贵重药品、微量包装药品的检验量可以酌减。要求检查沙门菌的供试品，其检验量应增加20g 或20ml （其中10g或10ml 用于阳性对照试验）。 检验时,应从2 个以上最小包装单位中抽取供试品，膜剂还不得少于4 片。 一般应随机抽取不少于检验用星（两个以上最小包装单位）的3 倍量供试品。 供试液的制备 根据供试品的理化特性与生物学特性，采取适宜的方法制备供试液。供试液制备若需加温时，应均匀加热，且温度不应超过45℃ 。供试液从制备至加入检验用培养基，不得超过1 小时。 除另有规定外，常用的供试液制备方法如下。 1.液体供试品 取供试品10ml ，加pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml ，混匀，作为l:10 的供试液。油剂可加入适量的无菌聚山梨酯80 使供试品分散均匀。水溶性液体制剂也可用混合的供试品原液作为供试液。 2.固体、半固体或黏稠性供试品 取供试品10g ，加pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至1OOml ，用匀浆仪或其他适宜的方法，混匀，作为1:10 的供试液。必要时加适量的无菌聚山梨酯80 ，并置水浴中适当加温使供试品分散均匀。 3.需用特殊方法制备供试液的供试品 （1）非水溶性供试品 方法1 ??取供试品5g（或5ml ) ，加至含溶化的（温度不超过45℃ ）5g司盘80 、3g单硬脂酸甘油酯、10g聚山梨酯80 无菌混合物的烧杯中，用无菌玻棒搅拌成团后，慢慢加人45 ℃ 的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml ，边加边搅拌，使供试品充分乳化，作为1 : 20 的供试液。 方法2 取供试品10g ，加至含20ml 无菌十四烷酸异丙酯（制法见附录XII A 无菌检查法中供试品的无菌检查项下）和无菌玻璃珠的适宜容器中．必要时可增加十四烷酸异丙酯的用量，充分振摇，使供试品溶解。然后加入45 ℃ 的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液10Oml ，振摇5～10 分钟，萃取，静置使油水明显分层，取其水层作为l : 10 的供试液。 （2）膜剂供试品 取供试品100cm2，剪碎，加pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液100ml （必要时可增加稀释液），浸泡，振摇，作为1:10 的供试液。 （3）肠溶及结肠溶制剂供试品 取供试品10g ，加pH6.8无菌磷酸盐缓冲液（用于肠溶制剂）或pH7.6 无菌磷酸盐缓冲液（用于结肠溶制剂）至100ml ，置45 ℃ 水浴中，振摇，使溶解，作为1 :10 的供试液。 （4）气雾剂、喷雾剂供试品 取规定量供试品，置冰冻室冷冻约1 小时，取出，迅速消毒供试品开启部位，用无菌钢锥在该部位钻一小孔，放至室温，并轻轻转动容器，使抛射剂缓缓全部释出。用无菌注射器吸出全部药液，加至适量的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液（若含非水溶性成分，加适觉的无菌聚山梨酯80 ）中，混匀，取相当于10g或10ml 的供试品，再稀释成1:10 的供试液。 （5）贴剂供试品 取规定量供试品，去掉贴剂的保护层，放置在无菌玻璃或塑料片上，粘贴面朝上。用适宜的无菌多孔材料（如无菌纱布）覆盖贴剂的粘贴面，以避免贴剂粘贴在一起。然后将其置于适宜体积并含有表面活性剂（如聚山梨酯80 或卵磷脂）的稀释剂中，用力振荡至少30 分钟，制成供试液。贴剂也可采用其他适宜的方法制备成供试液。 （6）具抑菌活性的供试品 当供试品有抑菌活性时，采用下列方法进行处理，以消除供试液的抑菌活性，再依法检查。常用的方法如下。 ① 培养基稀释法?? 取规定量的供试液，至较大量的培养基中，使单位体积内的供试品含量减少，至不含抑菌作用。测定细菌、霉菌及酵母菌的菌数时，取同稀释级的供试液2ml ，每1ml供试液可等量分注多个平皿，倾注琼脂培养基，混匀，凝固，培养，计数。每1