蔬菜上有机磷和氨基甲酸酯类农药残毒快速检测方法.doc

蔬菜上有机磷和氨基甲酸酯类农药残毒快速检测方法（除韭菜外）果菜类 豆菜类 瓜菜类 根菜； 1范围：本标准规定了甲胺磷等有机磷和克百威等氨基甲酸酯类农药在蔬菜中的残毒快速检测方法。 本标准适用于叶菜类叶菜类（除韭菜外）果菜类 豆菜类 瓜菜类 根菜类（除胡萝卜 茭白）中甲胺磷 氧化乐果 对硫磷 甲拌磷 久效磷 倍硫磷 杀扑磷 敌敌畏 克百威 涕灭威 灭多威 抗蚜威 丁硫克百威 甲萘威 丙硫克百威 速灭威 残杀威 异丙威等的农药残毒的快速检测。 2原理： 有机磷和氨基甲酸酯类农药能抑制昆虫中枢和周围神经系统中乙酰胆碱酯酶的活性，造成神经传导介质乙酰胆碱的积累，影响正常传导，使昆虫中毒死亡，根据这一昆虫毒理学原理，用在对农药残留的检测中。加入反应试剂后，用分光光度计测定吸光值随时间的变化值，计算出抑制率，判断蔬菜中含有有机磷或氨基甲酸酯类农药的残毒情况。即： 乙酰胆碱酯酶+有机磷或氨基甲酸酯类农药→酶活性被抑制 →活性被抑制→样本中含有有机磷或氨基甲酸酯类农药 乙酰胆碱酯酶+样本提取液︱→ →活性正常→样本中不含有有机磷或氨基甲酸酯类农 如以乙酰硫代胆碱（AChE）为底物，在乙酰胆碱酯酶（AChE）的作用下乙酰硫代胆碱（AsCh）水解成硫代胆碱和乙酸，硫代胆碱和二硫双对硝基苯甲酸（DTNB）产生显色反应，使反应液呈黄色，在分光光度计410纳处有最大吸收峰，用分光光度计可测的酶活性被抑制程度（用抑制率表示）。 3试剂： 3.1磷酸缓冲液。 3.2丁酰胆碱酯酶：根据酶活性情况按要求用缓冲液溶解，⊿A值控制在0.4～0.8之间。 3.3底物典化硫代丁酰胆碱，用缓冲液溶解。 3.4显色济：二硫代二硝基甲酸，用缓冲液溶解。 4仪器: 4.1波长为410纳米±3纳米专用测速仪,或用可见光分光度计. 4.2电子天平（准确度0.1克）. 4.3微型样品混合器. 4.4台式培养箱 4.5可调移液枪: （10～100微升,1～5毫升）. 4.6不锈钢取样器（内径2厘米）. 4.7 配套玻璃仪器及其他配件等. 5 检测 5.1 取样 用不锈钢管取样器取来自不同植株叶片(至少八～十片叶子)的样本;果皮从表皮到果肉1-1.5厘米处取样. 5.2检测过程 取两克切碎的样本(非叶菜类取4克),放入提取瓶内,加入20毫升缓冲液震荡一到两分钟,倒出提取液,静止3-5分钟;于小试管内分别加入五十微升酶,3毫升样本提取液,50微升显色剂,于37～38℃下放置30分钟后再分别加入50微升底物,倒入比色杯中,用仪器进行测定. 5.3 检测结果计算 检测结果按式(1)计算 抑制率(%)=﹝△ΑC-△Αs﹞/△Αc ×100 (1) 式中 △ΑC——对照组三分钟后与三分钟前吸光值之差; Αs——样本三分钟后与三分钟前吸光值之差. 抑制率≥70%时,蔬菜中含有某种有机磷或氨基甲酸酯类农药残毒.此时样本要有2次以上重复检测,几次重复检测的重现性应在80%以上. 6最低检出浓度 本方法的最低检出浓度见表1。 农药中文名 毒性 最低检出浓度（溶液）毫克/升 最低检出浓度（蔬菜）毫克/千克 甲胺磷 高毒 1～2 3～5 氧化乐果 高毒 0.7～2 2～5 对硫磷 高毒 0.7～1.5 2～4 甲拌磷 高毒 0.3～0.7 1～2 倍硫磷 高毒 2～2.5 6～7 久效磷 高毒 0.3～0.7 1～2 杀扑磷 高毒 2～2.5