铅对洋葱根尖细胞分裂及其染色体畸变影响.pptVIP

铅对洋葱根尖细胞分裂及其染色体畸变影响 （1）了解微核发生的机制 （2）学会铅诱变染色体畸变的各种类型，为进行环境监测和诱变育种提供细胞学方面的依据。 （3）初步掌握实验方案设计，数据整理及结果分析和论文撰写等技能。 实验目的： 实验原理： 　　　 在环境污染物中存在着许多具有诱变活性的物质，能直接或间接的诱发生基因突变，染色体畸变等细胞遗传损伤。微核也叫卫星核，是染色体畸变在间期细胞中的一种表现形式。在临床骨髓和外周血检中被称为豪厄尔-若利小体。 　　　 细胞染色体发生断裂后，细胞进入下一次分裂时，染色体片段不能随有丝分裂进入子细胞，在细胞质中形成直径在主核的1/3以下，嗜色与主核一致，完全与主核分开的圆形或杏仁状结构，称为微核。微核的折光率及细胞化学反应性质和主核一样，也具有合成DNA的能力。 　　　 近年来，由于自然因素和人类活动影响，如农业生中施用含Pb的肥料，灌溉含Pb的污水、污泥农用，农田土壤Pb污染日益严重，农作物pb毒害现象时有发生。农作物受到Pb污染后，不仅影响其产量和质量，更为严重的是Pb经食物链进入人体，并在人体内富集，危害人类健康。因此，环境Pb污染问题不容忽视，Pb毒害的研究越来越引起人们的广泛重视。 据有关研究表明，cd、Pb可引起光合强度下降、保护性酶发生变化、体内营养元素失调等。植物细胞微核、染色体畸变、有丝分裂指数等细胞遗传学指标被公认为是评价环境化学物质遗传性的有效方法之一。对大麦、洋葱、蚕豆等根尖细胞的观察结果表明，cd、Pb等元素可引起根尖细胞分裂出现障碍或不正常分裂，表现为细胞分裂周期延长，产生染色体畸变。因此在此基础上，我们研究Pb对小麦根尖细胞分裂和染色体畸变的影响 　　　实验器材： 显微镜 剪刀 载玻片 盖玻片 吸水纸 纱布 培养皿 滴管 刀片 解剖针 镊子 烧杯（5个） 实验材料： 　　　在学校附近农贸市场买取五个洋葱，用蒸馏水培养至不定根长至1~1.5cm时。 　实验试剂： 　　　蒸馏水 1mol/L HCL Carnoy固定液 （冰乙酸：无水乙醇=1:3） 70%乙醇 改良品红染液 氯化铅（0.01 ug/ml 0.1 ug/ml 1 ug/ml 5 ug/ml 10 ug/ml） 　　　 　　　实验步骤： 　　　实验组 　　　取制备好的实验材料进行染毒处理，选择4个洋葱，用配好的不同浓度氯化铅染毒（浸没根尖即可）处理1~2d。然后取出根尖，用蒸馏水冲洗，并移至蒸馏水中培养22~26h。 　　　材料固定：取恢复培养结束的洋葱，切下0.5~1cm根尖，置于Carnoy固定液中12~14小时。固定后的根如果不立即制片，可转入70%乙醇中置于4℃冰箱中保存。 　　　材料解离：将固定后的根尖材料用蒸馏水浸洗2次，然后用0.1mol/L的盐酸在60℃恒温水浴中解离15~20min，幼根软化即可。 　　　制片：将解离后的根尖材料用蒸馏水漂洗数次，取出根尖置于载玻片上，丛根冠起切取1~105mm，用解剖针捣碎，加1或2滴改良品红染液，染色10~15min后，盖上盖玻片轻压。 　　　镜检：在低倍镜下找到分生区细胞分散均匀，分裂相对较多的部位，再转高倍镜观察。观察微核，及细胞分裂异变的各种形态。 　　　对照组： 　　　材料固定：，切下0.5~1cm根尖，置于Carnoy固定液中12~14小时。固定后的根如果不立即制片，可转入70%乙醇中置于4℃冰箱中保存。 　　　材料解离：将固定后的根尖材料用蒸馏水浸洗2次，然后用1mol/L的盐酸在60℃恒温水浴中解离15~20min，幼根软化即可。 　　　制片：将解离后的根尖材料用蒸馏水漂洗数次，取出根尖置于载玻片上，丛根冠起切取1~105mm，用解剖针捣碎，加1或2滴改良品红染液，染色10~15min后，盖上盖玻片轻压。 　　　镜检：在低倍镜下找到分生区细胞分散均匀，分裂相对较多的部位，再转高倍镜观察。观察微核，及细胞分裂异变的各种形态。 实验结果： 对照组： 有丝分裂中期 有丝分裂后期 有丝分裂后期 实验组： 0.1 ug/ml 氯化铅 1 ug/ml 氯化铅 5ug/ml氯化铅 100ug/ml氯化铅 500ug/ml氯化铅 　　结果分析：实验结果不太明显，没有在显微镜下看见明显的染色体畸变，可能是浓度梯度设置的不好，也可能是氯化铅对染色体畸变影响不明显。 实验感悟：此次实验中实验前做的准备还算充分，但是在实验中制片染色不是很好，导致实验现象不足明显，但没一位组员都不放弃，团结一致，努力做了几次片观察，可效果还是不明显，但我们努力过，也在试验中学到啦许多东西。