鄂西北地区规模化猪场仔猪腹泻疫情原因分析.doc

鄂西北地区规模化猪场仔猪腹泻疫情原因分析猪传染性胃肠炎、 流行性腹泻和轮状病毒肠炎是猪的高度接触性肠道传染病， 多发生于冬春季节， 呈地方性流行或散发。猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、流行性腹泻病毒(PEDV)、 轮状病毒(PＲV)等病原可通过带毒母猪胎盘和乳汁传播给仔猪，也可通过仔猪间的直接接触经消化道和呼吸道传播。猪致病性大肠杆菌可引起仔猪黄痢、 白痢和水肿病。在临床诊断过程中， 这些引起仔猪腹泻的病原不易区分。上述三种病毒间可呈现混合感染， 或与致病性大肠杆菌混合感染， 能引起 10 日龄以内的仔猪严重脱水， 死亡率高(平均 50%左右， 最高可达 100%)。2011 年 12 月份以来， 鄂西北地区多家猪场仔猪出现水样腹泻、 呕吐和迅速脱水等传染病， 抗生素治疗效果差。为查找病因， 笔者于 2011 年 12 月份—2012 年 6 月份， 对本地区发生严重腹泻的 26 家规模化猪场饲养的猪群进行临床观察、 病理剖检和实验室诊断， 确定本次仔猪腹泻的主要病原是流行性腹泻病毒， 并提出了可行的应对措施。1材料与方法1． 1主要试剂及培养基TGEV、 PEDV、 PＲV qＲT － PCＲ 检测试剂盒， 购自北京世纪元亨动物防疫技术有限公司;M． Ｒ． 试剂、V － P 试剂、 微量生化发酵管， 购自杭州微生物试剂有限公司;猪胆盐、 牛肉膏、 蛋白胨， 购自北京奥博星生物技术有限责任公司;革兰染液、 麦康凯培养基、 1%蛋白胨培养基、 靛基质试剂、 三糖铁琼脂培养基、 硫化氢试验培养基， 自制。1． 2病料无菌采集典型腹泻仔猪脏器和肠腔内新鲜粪样，3 h 内进行细菌分离和病毒检测。1． 3流行病学调查调查发病猪群的免疫情况、 仔猪腹泻流行规律和死亡率。1． 4临床观察对腹泻仔猪精神状态、粪便颜色和质地、 体表特征以及体温等临床特征进行详细观察记录。向养殖场有关技术人员询问病死猪死前的一些临床表现。1． 5病理剖检对病死猪进行剖检， 重点观察肩前淋巴结、 腹股沟浅淋巴结、 肠系膜淋巴结的外观和质地，心脏、 肝脏、 脾脏、 肾脏的外观和质地， 小肠和大肠的肠壁病变和肠内容物的特征。1． 6细菌学鉴定1．6． 1细菌的分离纯化将无菌采集的病料接种于巧克力培养基和麦康凯培养基， 37 ℃培养 18 ～24 h，观察细菌生长情况、 菌落特征， 并对可疑菌落进行染色、 镜检、 纯化和菌种保存。1． 6． 2生化鉴定对所有分离的菌株进行生化试验， 具体操作参照参考文献［ 1］ 进行。1．6．3动物试验为了鉴定所分离的菌株是否具有致病性，使用小白鼠进行动物回归试验。每次试验选用 20 只 16 ～20 g 健康昆明系小白鼠(购自襄阳职业技术学院医学院)， 随机分为对照组和试验组。将纯化菌株接种于普通营养琼脂培养基培养18 ～20 h;用无菌生理盐水洗下制成菌悬液(约 20 ×108～50 ×108个/ mL)， 再将菌悬液腹腔注射健康小白鼠(0． 5 mL/只)， 隔离饲养， 观察小白鼠的发病死亡情况。剖检小白鼠， 取病变明显的组织接种于巧克力培养基和麦康凯培养基， 37 ℃培养 18 h， 挑取可疑菌落进行染色、 镜检、 生化鉴定， 观察是否为接种菌株。1．7病毒学鉴定1．7．1样本的采集对新发生腹泻的仔猪， 使用一次性无菌注射器， 吸取无污染新鲜粪便 2 mL;对因腹泻脱水死亡猪只进行解剖， 取肿胀肠系膜淋巴结 2 g，或取半透明充胀小肠肠段 3 cm， 两端结扎。所采样本均装入无菌自封袋， 标号后冷藏， 待检。1．7．2样本的处理??? 组织样品的处理:分别从肠系膜淋巴结的 3 个不同位置取样， 或剪取肠段， 称取样品约 1 g， 用手术剪剪碎， 混匀， 再取 0． 05 g 于研磨器中研磨， 加入1． 5 mL 生理盐水继续研磨， 待匀浆后转至 1． 5 mL 灭菌离心管中， 8 000 r/min 离心 2min;取上清液 100 μL 于 1． 5 mL 灭菌离心管中， 用于病毒ＲNA 的提取。??? 粪便样品的处理:取约 0． 05 g 粪便于1． 5 mL灭菌离 心 管 中，加 入 1 mL 生 理 盐 水 涡 旋 振 荡，8000 r/min离心 2 min， 取上清液 100 μL 于1． 5 mL灭菌离心管中， 用于病毒 ＲNA 的提取。1．7．3病毒实时荧光 ＲT － PCＲ(qＲT － PCＲ)的检测按照 PEDV、 PＲV、 TGEV qＲT － PCＲ 检测试剂盒的操作规程进行病毒 ＲNA 的提取和 qＲT － PCＲ 扩增检测。1．7． 4结果判定??? 如阳性对照 Ct 值≤35 并出现特定的扩增曲线， 阴性对照无 Ct 值并且无特定扩增曲线， 试