金银花有效成分提取工艺的优化研究.doc

金银花有效成分提取工艺的优化研究 陆凤琪，杨硕，胡勃，陈文成， 陆泉，储明明，王延明 指导老师：时维静教授 摘要：目的 研究金银花抑菌成分的最佳提取工艺。方法 以绿原酸为检测指标，研究了不同的提取方法对绿原酸含量的影响。并结合抑菌试验来综合考虑金银花抗菌成分的最佳提取工艺。结果 最佳提取工艺为乙醇回流提取法 关键词：金银花 绿原酸 提取工艺 抑菌活性 Extraction process of Antimicrobial Constituents From Flos Lonicerae Abstract：Objective：he optimum extracting condition of antimicrobial constituents from flos lonicerae. Methods: To determine the chlorogenic acid, the content of Chlorogenic acid was studied the effect of different extracting condition and the antimicrobial abilities by extract. Results: The optimum extracting condition was reflux extraction with alcohol Key words: flos lonicerae; chlorogenic acid; extraction process; antimicrobial abilities 金银花为忍科植物忍冬Lonicera japonica Thunb.、红腺忍冬Lonicera hypoglauca Miq.、或毛花柱忍冬Lonicera dasystyla Rehd.的干燥花蕾或带初开的花。其中绿原酸为金银花的主要抑菌活性成分，具有清热解毒、抗菌消炎和抗衰老的作用，现代药理研究表明，其还具有保肝利胆、调节免疫、升高白细胞、降血压、降血脂、清除自由基，并对消化道的癌症有明显的抑制作用。 绿原酸类化合物是含有羧基和邻二酚羟基的有机酸，易溶于水，乙醇等溶剂。从金银花中提取绿原酸多采用煎煮法、浸渍法、回流法等，目前在分离绿原酸的方法常采用改良石硫法、水提醇沉法、乙醇热回流法、水提正丁醇萃取法等，但是在那种提纯方法最好，目前国内学者还没有确定的结论，有的人认为乙醇热回流法最好[1]，并且有人就乙醇热回流提取法进行了深入的研究[2] 。为了进一步了解那种提取方法对金银花中抑菌成分的提取效果最好，我们分别做了改良石硫法、水提醇沉法、乙醇热回流法、水提正丁醇萃取法，并用不同的提取物来做抑菌试验，结合了提取物中绿原酸的含量来确定金银花抑菌成分的最佳提取工艺。并且就乙醇热回流法做了正交试验，来寻找影响金银花中抑菌成分的提取的因素，为进一步优化金银花乙醇提取工艺提供参考。 材料和仪器 金银花购自安徽亳州药材市场，经安徽科技学院生命科学学院刘汗珍副教授鉴别本品为忍冬科植物忍冬Lonicera japonica Thunb.的花蕾。绿原酸对照品购自（中国药品生物制品鉴定所），其余试剂均为分析纯。 供试菌种：枯草芽孢杆菌；金黄色葡萄球菌；大肠杆菌；绿脓杆菌。（由安徽科技学院微生物实验室提供） 培养基：细菌用营养琼脂。蛋白胨10g，牛肉膏3g，NaCl 5g，琼脂15g葡萄糖5g水1000ml，PH值7.2。在121.3℃灭菌20min。 TU—1810 紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司）；DHG—781 电热恒温培养箱（湖北省黄石市医疗器械厂）；RE 52—98 旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）；ZDX—35 手提式压力蒸汽灭菌器。 2 方法与结果 2. 1 绿原酸提取方法的比较 常用的中药溶剂提取法有:浸渍法,渗漉法,煎煮法,回流提取法和循环提取法.目前金银花的提取方法主要有水提法,石硫法,水提醇沉法,乙醇回流法等。对各种提取纯化工艺进行比较评价的指标主要有:绿原酸得率,绿原酸提取率和绿原酸含量 2.1.1 改良石硫法 取金银花50克，加15倍量的水，浸提（温度不超过80度为好，避免破坏绿原酸的成分）。提取时间为2小时，再加水10倍量煎煮一个半小时，合并提取液静止12小时以后，浓缩至1：2.5（w/v），缓缓加入20%的石灰乳调PH值至10左右，离心，沉淀物，加入2倍量95%乙醇研磨成浆，搅拌下滴加50%硫酸调PH至3左右，充分搅拌，离心，酸水液用40%NaOH调PH为6左右，回收乙醇，减压烘干，得粗提取物。 粗提取物溶于2～3倍量水中，HCL调PH为2，以乙酸乙酯萃取数次，乙酸乙酯液用活性碳脱色