11线粒体和液泡系的活体染色.ppt

实验七 线粒体和液泡系的活体染色 实验目的： 1. 观察动、植物活细胞内线粒体、液泡系的形态、数量与分布； 2. 学习一些细胞器的超活染色技术。 实验原理 活体染色：是能使生活有机体的细胞或组织特异性着色但对活样品又没有毒害作用的一种活体染色方法，其目的是显示生活细胞内的某些结构，而不影响细胞的生命活动和产生任何物理、化学变化以致引起细胞的死亡。 应用：活体染色技术可用来研究生活状态下的细胞形态结构和生理、病理状态。 分类：根据所用染色剂的性质和染色方法的不同，通常把活体染色分为体内活体染色与体外活体染色两类。体内活体染色是以胶体状的染料溶液注入动、植物体内，染料的胶粒固定、堆积在细胞内某些特殊结构里，达到易于识别的目的。体外活体染色又称超活染色，它是由活的动、植物分离出部分细胞或组织小块，以染料溶液浸染，染料被选择固定在活细胞的某种结构上而显色。 活体染色的原理 活体染料之所以能固定、堆积在细胞内某些特殊的部分，主要是靠染料的“电化学”特性。碱性染料的胶粒表面带阳离子，酸性染料的胶粒表面带有阴离子，而被染的部分本身也是具有阴离子或阳离子，这样，它们彼此之间就发生了吸引作用。 但并非任何染料均可用于活体染色，理论上应选择那些对细胞无毒性或毒性极小的染料，且使用时需要配成稀淡的溶液。 一般说来，最为适用的是碱性染料，这可能是因为它具有溶解在类脂质(如卵磷脂、胆固醇等)的特性，易于被细胞吸收。 线粒体的超活染色 线粒体是细胞进行呼吸作用的场所，其形态和数量随不同物种、不同组织器官和不同的生理状态而发生变化。 詹纳斯绿B是毒性较小的碱性染料，可专一性地对线粒体进行超活染色，这是由于线粒体内的细胞色素氧化酶系的作用，使染料始终保持氧化状态(即有色状态)，呈蓝绿色；而线粒体周围的细胞质中，这些染料被还原为无色的色基(即无色状态)。 液泡系的超活染色 中性红为弱碱性染料，对液泡系(即高尔基体)的染色有专一性，只将活细胞中的液泡系染成红色，细胞核与细胞质完全不着色，这可能是与液泡中某些蛋白质有关。 实验步骤 1、人口腔粘膜上皮细胞线粒体的超活染色观察 取清洁载玻片 ↓ 滴2滴1/5000詹纳斯绿B染液 ↓ 用牙签口腔颊粘膜处稍用力刮取上皮细胞 ↓ 刮下的粘液状物放于载玻片的染液滴中 ↓ 染色10~l5min(注意不可使染液干燥，必要时可再加滴染液) ↓ 盖上盖玻片,显微镜下观察 在低倍镜下，选择平展的口腔上皮细胞，换高倍镜观察，可见扁平状上皮细胞的核周围胞质中，分布着一些被染成蓝绿色的颗粒状或短棒状的结构，即是线粒体。 2、洋葱内表皮细胞线粒体的超活染色 用吸管吸取1/5000詹纳斯绿B染液，滴一滴在干净的载玻片上，然后撕取洋葱鳞茎内表皮1小块，置于染液中，染色15min。 吸去染液，加一滴Ringer液，注意使内表皮展平，盖上盖玻片，显微镜观察。 先用低倍镜进行观察，找到细胞后，即可转入高倍镜继续观察，此时，要注意细胞核位于细胞的近中部的一侧。在它的周围有致密的原生质体，在原生质中有被染成蓝绿色的小颗粒。此即线粒体。 3、蛙胸骨剑突软骨细胞的液泡系活体染色 解剖蛙，剪取胸骨剑突软骨最薄部分一小块，放入载玻片中央的1/3000中性红染液中，染色5～10min。然后用吸管吸去染液，滴加1－2滴Ringer液，盖上盖玻片，用油镜观察。 可见软骨细胞为椭圆形，细胞核及核仁清楚，在细胞核上方的胞质中，有许多被染成玫瑰红色的大小液泡，这一特定的区域叫做高尔基区。 4、蛙肝脏细胞线粒体的活体染色 解剖蛙，迅速取其肝脏。沿肝脏边缘，用刀片切取2—3mm厚的切片，置玻片上，加2—3滴1/5000浓度的詹纳斯绿染液，染色20—30分钟。吸去染液，滴一滴Ringer液，加上盖玻片，再放上一张小滤纸，用拇指轻压载片，使细胞分离或压碎。 注意：最后取肝脏与染液交界处已经变色的部位来观察。 作业 分别绘图示液泡系、线粒体形态和分布。 * * *