免疫标记技术.ppt

  1. 1、本文档共81页,可阅读全部内容。
  2. 2、有哪些信誉好的足球投注网站(book118)网站文档一经付费(服务费),不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
  3. 3、本站所有内容均由合作方或网友上传,本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺!文档内容仅供研究参考,付费前请自行鉴别。如您付费,意味着您自己接受本站规则且自行承担风险,本站不退款、不进行额外附加服务;查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档,您可以点击 这里二次下载
  4. 4、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“版权申诉”(推荐),也可以打举报电话:400-050-0827(电话支持时间:9:00-18:30)。
查看更多
免疫标记技术

瘦肉精中毒事件 2000年以来,内地相继发生18起瘦肉精中毒事件,中毒人数达1700多人,死亡1人(不包括上海2006年集体中毒事件) 瘦肉精残留及危害不容忽视,瘦肉精替代品暗潮涌动 上海9.13瘦肉精食物中毒事件(2006年) “瘦肉精”学名为盐酸克伦特罗,医学上又称克喘素,常用于治疗哮喘。 由于盐酸克伦特罗添加于饲料饲喂动物后可明显促进动物生长,提高 瘦肉率, 所以养殖户称其为“瘦肉精”,曾在国内外广泛用于动物饲养 生猪食用瘦肉精后皮毛光亮,呼吸急促,个别会出现腿抽搐,站不 稳,爬坡困难;宰后猪的肌肉特别鲜红,后臀肌肉饱满,肥肉非常薄 瘦肉精介绍 瘦肉精介绍 “瘦肉精”化学性质特别稳定,加热到170℃时才能被分解,故一般家庭厨房加热不能将其分解破坏 食用后在胃肠道吸收快,作用维持时间持久。中毒后主要症状表现为头疼、头晕、心悸、心慌、面色潮红、四肢发抖等症状 违法者使用该物质以提高猪的瘦肉率和颜色鲜艳程度,不知情的市民 错误地认为这样的肉才是“好肉”而特别喜欢选购 《食品卫生法》 《食品添加剂卫生管理办法》(GB2760) 《动物性食品中兽药残留最高限量》(农业部公告第235号, 2002年12月24日)规定:禁用药物,动物性食品中不得检出: 瘦肉精、沙丁胺醇、西马特罗等31种 违法者的法律责任:民事赔偿、行政处罚、刑事处罚 法律规定 盐酸克伦特罗残留检测方法 《动物性食品中克伦特罗残留量的测定》 (GB5009.192-2003) 第一法:气相色谱——质谱法,检出限:0.5ppb 第二法:高效液相色谱法,检出限:0.5ppb 第三法:酶联免疫法(ELISA筛选法) ,检出限:0.5ppb 《动物组织中盐酸克伦特罗的测定——气相色谱/质谱法》 (NY/T 468-2006),检出限:2.0ppb 《动物尿液中盐酸克伦特罗的测定——气相色谱/质谱法》 (NY/XQ 421-2003),检出限:1.0ppb 《尿液中盐酸克仑特罗的测定胶体金免疫层析法 (NY/T933-2005),检出限:3.0ppb 猪肉全程监控中瘦肉精检测方法的选择 生猪饲养 屠宰场 大型批发市场 零售市场 饲料检测 猪尿检测 猪尿检测 猪肉检测 猪肉 检测 猪肉 检测 酶联免疫法 免疫胶体金 免疫胶体金 酶联免疫法 免疫胶体金 筛检阳性 GC-MS确认 大型仪器确认 政府部门 监督抽检 GC-MS 餐饮业 猪肉 检测 免疫胶体金 销毁和溯源 阳性 GC-MS确认 大型仪器确认 阳性 免疫胶体金快速检测板的外观图 免疫胶体金快速检测板(试剂)的结构图 检测原理 盐酸克伦特罗快速检测试剂板的中央膜面上固定有两条隐形线,克伦特罗抗原固定在测试区作为检测线(T线),二抗固定在质控区作为对照线(C线)。 当待检样品溶液滴入试剂板加样孔后,样品溶液因层析作用往上扩散。如果样品溶液含有相应药物的残留,药物将和胶体金颗粒上的抗体先行反应,因此当胶体金颗粒随样品溶液扩散至T线时,胶体金颗粒上抗体活性位点将因被样品溶液中的药物占据而无法与T线上药物抗原结合;所以当样品中盐酸克伦特罗含量1ppb(检测限)以上时,试剂板上的T线将较C线显色淡或甚至无显色,判定为阳性。反之,当样品中盐酸克伦特罗含量在1ppb以下或无残留时,试剂板上的T线显色与C线相近或偏深,判定为阴性 灵敏度 肉样或组织样:1ppb(标准前处理)或5ppb(简单前处理) 尿样: 1ppb(标准前处理) 特异性:与沙丁胺醇等苯乙胺类药物没有交叉反应; 准确性:与瘦肉精ELISA试剂盒的检测结果符合率90% 有效期:半年(冷藏闭光保存) 胶体金免疫层析法检测瘦肉精的技术指标 操作步骤 于5ml离心管中加入5g左右剪碎或是高速匀 浆过的猪肉组织样,盖紧管盖 1 将装有样品的离心管在90℃以上水浴锅中加热10 分钟 加热完成后取出冷却至室温;可以明显看 到底部有溶液渗出 3 2 吸取3滴(约100ul)煮出的样品渗出液到1.5ml的离心管中 4 操作步骤 吸取3滴(约100ul)盐酸克伦特罗组织样专用稀释液到1.5ml离心管中。充分混合均匀 从包装铝箔袋中取出检测卡平放。吸取3滴(约100ul)混匀溶液加入到试剂板加样孔中 5 6 7 样液滴入加样孔后开始计时,5~10分钟左右判定结果 (四)免疫印迹技术 Immunoblotting Test,IBT 又称蛋白质印迹(Western blotting) 是一种借助特异性抗体鉴定抗原

文档评论(0)

xuchangbin + 关注
实名认证
内容提供者

该用户很懒,什么也没介绍

1亿VIP精品文档

相关文档