CBL第四组病例分析.ppt

病例四、8岁男孩的全身乏力及淋巴结肿大 患儿男性，8岁，学生。因全身乏力、腹部不适、全身关节酸痛三个多月入院。患儿四个月前因呕吐、发烧，一周后出现双下肢瘫痪先后到当地几家医院诊治。曾做腰穿、脑电、颅脑CT等检查，诊断为：小脑共济失调、脑炎等病，用过青霉素、激素溉量合剂等药物治疗，半月后瘫痪逐渐恢复，但全身乏力、头痛头晕关节酸痛、腹部不适症状加重，致使患儿整日躺在床上，连晨起穿衣都因无力而发生困难。 住院后经询问病史:患儿家里养猫，每日玩猫，并常与猫夜间睡在一个床上被子里。查体：双领下各触及一约1.5cm大小肿大淋巴结，可移动，无压痛。 1 本例患者你如果怀疑是弓形虫病，病例中有哪些因素可以支持这个初步诊断？ 1 全身乏力、腹部不适、全身关节酸痛三个多月入院。 2 患儿家里养猫，每日玩猫，并常与猫夜间睡在一个床上被子里。 3 查体：双领下各触及一约1.5cm大小肿大淋巴结，可移动，无压痛。 2 对这个男孩，那么你下一步要进行的什么实验室检查？ 淋巴结穿刺镜检 血清循环抗原检测 3 弓形虫病的实验诊断方法有哪些？请详述这几种方法，分别阐述这几种方法的优势与不足。 1 病原学诊断方法 传统的弓形虫病的诊断主要包括涂片染色法、动物接种法。涂片染色法即取病料(肺、肝、淋巴结等)作抹片，干燥后用甲醛固定，姬姆萨或瑞氏染色，镜检，查出弓形虫虫体即可确诊。。动物接种法即将病料研磨后过滤加PBS或液体病料离心浓缩，给易感动物接种，进行弓形虫虫体的分离，至少盲传3代以后没有发现弓形虫才可以认为阴性。 病原学诊断方法较为简单，结果可靠，在过去近一个世纪的弓形虫病诊断中曾起到非常重要的作用。但检出率低，耗时，容易漏诊，一般不能进行生前诊断。另外，动物接种法有时有扩散病原，甚至造成操作者自身感染的危险 2 免疫学诊断方法 一般采用直接凝集试验(DAT)、间接血凝试验(IHA)、改良凝集试验(MAT)、酶联免疫吸附试验(ELISA)、补体结合试验(C，r)、染色试验(DT)、间接荧光免疫试验（IFAT)等十多种方法检测抗弓形虫抗体或循环抗原，但应用较多的是IHA、ELISA和IFAT方法 ELISA法敏感性强、特异性好、易于标准化，但是耗时费力，稳定性也不够理想 3 分子生物学诊断方法 目前应用于PCR检测的靶基因序列有：Bl基因、P30基因、核糖体DNA。B1基因由BURG在1989年首次鉴定，35倍重复的多拷贝基因，序列高度保守，是目前最为理想的引物之一。 PCR技术快速、敏感、特异性强，，但由于对实验室要求条件较高且具有经过严格训练的专门技术人员才可上岗，有其一定的局限性。 综上所述，病原学培养和动物接种操作复杂，但却是弓形虫检测的金标准。传统的血清学方法，在区分现症和既往感染及诊断免疫缺陷患者方面有缺陷，但由于操作简单，仍然是各实验室的首选方法 4 本病例中患者可能的感染方式是什么？治疗药物首选什么？ 误食猫排出的卵囊 猫的身上和口腔内常常有弓形虫包囊和活体，直接接触猫受感染。 乙胺嘧碇和磺胺嘧啶联合用药 5 刚地弓形虫病目前的实验室诊断方法国内外的研究进展或研究热点和研究趋势。 1 聚合酶链反应(PCR) PCR技术是20世纪80年代中期发展起来的一种体外核酸扩增技术，它是通过直接分析遗传物质的多态性判断生物内在基因排列特性、转录、复制及其外在性状的表现规律。PCR技术比传统的病原学及ELISA更敏感，适合于弓形虫感染的早期诊断，并且可以分辨不同类型的弓形虫感染。 2 巢式PCR 巢式PCR技术是在常规PCR技术基础上发展的一种新方法，它利用内、外两对引物先后扩增，从极少量的模板中获得较高浓度和纯度的靶片段，从而提高了检测的敏感性，可应用于不同临床标本的检测。巢式PCR技术不仅容易操作、产生结果迅速、价格相对较低，而且和常规镜检法相比，省时省力、操作简单，敏感性和特异性都比较高。 3 实时PCR 实时PCR技术是在常规PCR基础上，运用荧光共振能量转移现象，加入荧光标记的探针，巧妙地把核酸扩增、杂交、光谱分析和实时检测技术结合在一起的新法。实时PCR技术具有敏感性、特异性和准确性高的特点，克服了常规PCR技术中存在的容易产生假阳性和不能进行准确定量的缺点。 4 免疫PCR 免疫PCR技术是把PCR技术与免疫学检测技术结合而发展为ELISA·PCR以及其他免疫PCR技术。免疫PCR技术同时具有常规PCR技术的敏感性和核酸杂交技术的特异性，检测结果更敏感、更准确，具有较大的优越性。但免疫PCR技术采用的待检抗原直接吸