高效液相色谱法测定乳制品中的三聚氰胺.doc

2010级化学教育仪器化学综合性与设计性实验 —高效液相色谱法测定乳制品中三聚氰胺的含量 ——2012-06-03 一、实验题目： 乳制品中三聚氰胺的含量的测定（高效液相色谱法） 二、摘要、关键词： [摘要] 三聚氰胺是一种三嗪类含氮杂环有机化合物,被用作化工原料。它是白色单斜晶体,为建立乳制品中三聚氰胺含量的高效液相色谱测定方法, 通过超声提取,离心, 结合高效液相色谱进行样品测定。A液：0.9508 g辛烷磺酸钠（5mmol/L）+ 1.0640 g柠檬酸（pH=3-4）用高纯水品配制1L溶液；B液：甲醇；色谱条件：30%B+70%A。 色谱柱：CNWSIL C18液相色谱柱（4.6×250mm，5 μm）,检测波长：240nm。 [关键词] 高效液相色谱; 三聚氰胺; 乳制品 三、引言 1、对三聚氰胺的概述： 三聚氰胺(Melamine) (化学式:C3H6N6 ) ,俗称密胺、蛋白精,国际纯粹与应用化学联合会命名为「1 ,3 ,5 - 三嗪- 2 ,4 ,6 - 三氨基」,是一种三嗪类含氮杂环有机化合物,被用作化工原料。它是白色单斜晶体,几乎无味,微溶于水(311g/PL常温) ,可溶于甲醇、甲醛、乙酸、热乙二醇、甘油、吡啶等,对身体有害,不可用于食品加工或食品添加物。三聚氰胺的结构式如下： 三聚氰胺最主要的用途是作为生产三聚氰胺甲 醛树脂(MF) 的原料。三聚氰胺还可以作阻燃剂、减水剂、甲醛清洁剂等。该树脂硬度比脲醛树脂 高, 不易燃,耐水、耐热、耐老化、耐电弧、耐化学腐蚀,有良好的绝缘性能、光泽度和机械强度,广泛运用于木材、塑料、涂料、造纸、纺织、皮革、电气、医药等行业。蛋白质主要由氨基酸组成。蛋白质平均含氮量为16 %左右,而三聚氰胺的含氮量为66 %左右。通用的蛋白质测试方法“凯氏定氮法”是通过检测含氮量来估算蛋白质含量,因此,添加三聚氰胺会使得食品的蛋白质测试含量偏高,从而使劣质食品通过食品 检验机构的测试。三聚氰胺常被不法商人添加到食品中,以提升食品检测中的蛋白质含量指标,因此三聚氰胺也被人称为“蛋白精”。2007 年“出口宠物饲料事件”后,我国全面开展了该物质的检测技术研究, 其中比较主要的方法有高效液相色谱法(HPLC) [1 ] 、液相色谱- 质谱P质谱联用法(LC - MSPMS) [2 ] 、气相色谱- 质谱联用法(GC - MS) [3 ] ,但检测方法主要针对宠物食品等,本方法在参考《美国食品化学品法典》(《Food Chemicals Codex》, FCC) 检测方法的基础上,筛选了适用的快速前处理方法,建立了乳与乳制品中三聚氰胺的高效液相色谱测定方法,该方法样品前处理简单,易操作,能够满足质量监督和卫生部门的检验需求。 2、对三聚氰胺的测定方法概述： 国家质量监督检验检疫总局与标准化管理委员会联合发布了《原料乳与乳制品中三聚氰胺检测方法》，即国标GB/T22388-2008。这一新标准制定了高效液相色谱法、液相色谱-质谱/质谱法及气相色谱-质谱联用法三种检测方法与标准。三聚氰胺的检测方法还包括试剂盒检测法（ELISA）、离子交换色谱-紫外检测法等。 2.1高效液相色谱法（HPLC)： 试样中的三聚氰胺用三氯乙酸溶液提取，提取液离心后经混合型阳离子交换固相萃取柱净化，洗脱物吹干后用甲醇溶液溶解，用高效液相色谱仪进行测定。在添加浓度2mg/kg～10mg/kg浓度范围内，回收率在80%～110%之间，相对标准偏差小于10%。 2.2气相色谱-质谱联用法（GC-MS和GC-MS/MS）： 试样经超声提取、固相萃取净化后，进行硅烷化衍生，衍生产物采用选择离子监测质谱扫描模式（SIM）或多反应监测质谱扫描模式（MRM），用化合物的保留时间和质谱碎片的丰度比定性，外标法定量。其中GC-MS法在添加浓度0.05mg/kg～2mg/kg浓度范围内，回收率在70%～110%之间，相对标准偏差小于10%；GC-MS/MS法在添加浓度0.005mg/kg～1mg/kg浓度范围内，回收率在90%～105%之间，相对标准偏差小于10%。 2.3液相色谱-质谱/质谱法（LC-MS/MS）： 试样用三氯乙酸溶液提取，经阳离子交换固相萃取柱净化后，用液相色谱-质谱/质谱法测定和确证，外标法定量。在添加浓度0.01mg/kg～0.5mg/kg浓度范围内，回收率在80%～110%之间，相对标准偏差小于10%。 2.4试剂盒检测法（Enzyme Linked Immunosorbent Assay ELISA）： 试剂盒检测法即为酶联免疫吸附剂测定，是利用萃取液通过 均质及震荡的方式提取样品中的三聚氰胺进行免疫测定的一种方法。 2.5离子交换色谱-紫外检测法