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西南民族大学 学生实习日记 教学单位： 生命科学与技术学院 级、专业： 2010级动物医学 学生姓名： 马英俊 学生学号： 201031304048 实习类别： 毕业实习 实习单位： 动物医学实验室 起止时间： 2014/3/20-2014/5/1 2013－2014 学年第2学期 教务处制 使用说明 一、本实习日记为参加我校各教学单位按教学计 划要求组织的各类实习的学生填写。 二、实习学生应如实记录实习过程中主要工作、 学习、活动情况及心得体会等内容。 三、实习类别填写“课程实习”或“毕业实习”。 四、实习日记填写次数根据实习情况而定。 五、实习日记作为评定学生实习成绩和实习总结 的重要依据。 六、本日记使用结束后由各教学单位存档备查。 西南民族大学学生实习日记 日期：2014/4/13 工作、学习、活动纪要：学习跑PCR、跑凝胶电泳技术 心得体会、存在问题、改进意见：初次接触PCR扩增,第一次跑电泳，兴趣甚浓。所以对这些技术也很用心地去学习，并加以掌握。虽然结果并不是太合意，但是对这些过程都有了一个较为系统的了解。大致过程如下：以提取的产肠毒素大肠杆菌DNA为模板，用引物对AST基因进行PCR扩增。PCR反应体系：上下游引物各1μL（引物浓度均为10 μmol/L），DNA模板1μL，ddH2O 17.3 μL，总体系为25μL。PCR反应条件：95℃预变性5min；变性95℃、30s，65℃退火、30s，延伸72℃、45s，35个循环； 最后72℃延伸5min。 PCR扩增产物用2%琼脂糖凝胶电泳检测，并统计阳性结果。在加体系的时候要遵循先多后少的原则，减少误差。至于配胶的时候，要注意尽量将琼脂糖加热到透明状态。给凝胶点样的时候要遵从“阴性第一个加，阳性最后一个加，保证无污染”原则。 日期：2014/4/14 工作、学习、活动纪要：学习RT—PCR技术并总结出现的问题。 心得体会、存在问题、改进意见： RT-PCR的要求有： 1.做RT前必需检测RNA的完整性和RNA浓度，逆转录体系对RNA量还是有一些要求，常用500 ng或1 ug。 2.RT按要求做，一般不会出太大问题。? 3.PCR，按常规。但如需扩长片段，则对前两步要求较高，需要有完整的cDNA存在。 出现问题可能的原因： 1.总RNA质量不好。在所有RNA实验中，最关键的因素是分离得到全长的RNA。而实验失败的主要原因是核糖核酸酶（RNA酶）的污染。由于RNA酶广泛存在而稳定，一般反应不需要辅助因子。因而RNA制剂中只要存在少量的RNA酶就会引起RNA在制备与分析过程中的降解，而所制备的RNA的纯度和完整性又可直接影响RNA分析的结果，所以RNA的制备与分析操作难度极大。在实验中，一方面要严格控制外源性RNA酶的污染；另一方面要最大限度地抑制内源性的RNA酶。RNA酶可耐受多种处理而不被灭活，如煮沸、高压灭菌等。外源性的RNA酶存在于操作人员的手汗、唾液等，也可存在于灰尘中。在其它分子生物学实验中使用的RNA酶也会造成污染。这些外源性的RNA酶可污染器械、玻璃制品、塑料制品、电泳槽、研究人员的手及各种试剂。而各种组织和细胞中则含有大量内源性的RNA酶。 2.引物设计的问题。 3.PCR条件的优化。 西南民族大学学生实习日记 日期：2014/4/15 工作、学习、活动纪要：PCR检测AST毒力基因。 心得体会、存在问题、改进意见：这一次还是按照原来的体系加样，按照原来的程序跑PCR，跑电泳。可是结果却很难看。之所以跑不出结果，我总结原因如下： 根据出现的纹路条带来看，可能是时间太久了的缘故。因为我是用电压 100v；电流 90MA 跑的电泳。但是过了50分钟的时间之后我才去照胶。并且从markⅠ的片段来看，确实是跑过度了。这次实验告诉我一定要把握好时间，一般蓝色条纹到了第三个格差不多就可以去照胶了。平时使用85v电压、85MA电流跑电泳一般能跑出很不错的结果 日期：2014/4/16 工作、学习、活动纪要：学习和掌握生化试验 心得体会、存在问题、改进意见：细菌的生化反应是指各种微生物生化试验方法原理 通常利用生化试验的方法，检测细菌对各种物质的代谢作用及其代谢产物，常用于细菌的鉴别。主要通过以下试验方法进行鉴定： 1、 糖类分解产物 （1）糖发酵试验（carbohydrate fermentation test）；（2）VP试验（Voges-Proskauer test）；（3）甲基红试验（methyl red test）；（4）枸橼酸盐利用试验(citrate utilization test）。 2、蛋白质及氨基酸的分解产物 （1）硫化氢试验