医用电子显微技术.doc

医用电子显微技术 绪 论 电镜室 陈明霞 Tel: E-mail: cmxem@mail.xjtu.edu.cn 电子显微镜——以电子束代替光束，以电磁透镜（电子透镜）代替玻璃透镜而使物体成像的。 （electron microscope, EM, 电镜） 分辨率——能够分辨两点间最小距离的能力 人眼的分辨率：0.1－0.2mm 人眼的分辨率：0.1－0.2mm——宏观水平 1665年人类发明了光学显微镜，其分辨率：0.2μm——微观/细胞水平 1931年德国科学家Knoll和Ruska发明了透射式电子显微镜，其分辨率：0.1-0.2nm （晶格） —分子细胞水平/ 超微结构 1935年Knoll，1942年M.Mullan(英国剑桥大学) 发明了扫描式电子显微镜，其分辨率：3-6nm transmission electron microscope，TEM, 透射电镜 scanning electron microscope, SEM，扫描电镜 电镜的应用 1、细胞生物学 EM—证实并丰富了细胞的微细结构 LM：线粒体、高尔基体等 EM：核糖体、微丝、微管等 细胞化学—决定酶蛋白的特定部位，证实结构的机能状态 冰冻蚀刻—生物膜结构真相单位膜液态相嵌学说 2、分子生物学、遗传学分子生物学：借助EM观察细胞器的生物功能 线粒体：氧化磷酸化全过程 ATP能源的产生→基粒内进行 核蛋白体/核糖体（核酸+蛋白质）： 核蛋白体/核糖体+信使核糖核酸（mRNA） → 多聚核蛋白体/多聚核糖体→电镜可见 （D=1-1.5nm） 遗传基因：DNA分子链中某一区段可用特殊方法展开成一单链→电镜可见 3、微生物学 1、进一步了解了细菌、真菌等形态结构 2、确定了病毒的形态 结构 3、发现了病毒复制合成及制病机理 4、临床快速诊断病毒性疾病 4、免疫学 在细胞超微结构水平上观察抗原抗体相互作用的部位，可解决LM难以定位的问题。如： 不孕症、白血病的诊断：单抗 胶体金 5、病理学/病理诊断学 （1）?病毒性疾病的诊断 （2）?肿瘤的诊断 （3）?肾脏疾病的诊断 （4）?肝脏疾病的诊断 （5）?骨骼肌疾病的诊断 （6）??临床疑难病例的诊断 （1）???? 病毒性疾病的诊断电镜是确定病毒形态结构最有效用的工具 超薄切片--感染细胞内病毒的大小、形态、排列及其复制组装、成熟的过程，有包膜病毒的芽生成熟的部位、病毒包含体的形态特征、致病病毒的鉴定和分类 负染色—快速、简单、诊断 （2）???? 肿瘤的诊断病理诊断：光镜+免疫组化—大部分肿瘤可以明确诊断 病理诊断的局限性：肿瘤的多项分化+免疫组化试剂的交叉反应 电镜诊断：利用电镜技术进行超微结构诊断—新途径 神经内分泌肿瘤—— 神经内分泌颗粒 （原发/转移）← 电镜识别 （3）???? 肾脏疾病的诊断诊断：光镜+免疫荧光+电镜，在某些疾病的诊断中，电镜起着决定性作用。 遗传性肾炎——基底膜分裂、板层 肾小球薄基底膜病——基底膜变薄 Farbry氏病——足细胞中大量的髓鞘样小体 肾淀粉样变——类淀粉样纤维 纤维性肾小球病——微管样纤维 ? （4）???? 肝脏疾病的诊断 ——代谢性疾病的诊断（肝穿刺） Wilson病 病变早期——线粒体大小、 形态不一；基质电子密度增高；内外膜分离等 （5）???? 骨骼肌疾病的诊断 代谢性肌病： 线粒体肌病——骨骼肌内含有大量的线粒体 糖原储积病——骨骼肌纤维间含有大量糖原 （6）???? 临床疑难病例的诊断 利用多种电镜技术 对临床（LM）难以确诊的病例进行诊断 急性白血病： 细胞具有高异质性+形态学特征—诊断60%-70%（LM） ↓WBC分化成熟过程中相应的细胞表面抗原 免疫电镜技术+EM酶细胞化学+形态特征 ↓ 诊断（EM） 贫血：RBC的形态学改变（SEM 6、 其它 理工科：各种材料的微