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液相色谱基础知识 Waters LC School 培训教材 常见的分离方式 蒸馏 离心 电泳 过滤 超滤 色谱 色谱法的分类 HPLC分离的机理 典型的仪器配置 液相色谱的应用（一） “分析型液相色谱” 定性及定量分析 灵敏度的要求 样品的复杂性 样品量的要求 精度及准确度的要求 容易使用 液相色谱的应用（二） “制备型液相色谱” 分离及纯化 化合物的稳定性 样品的复杂性 制备量的要求 纯度的要求，及纯度的鉴定 方法的安全性 开发液相色谱方法 什么是色谱的分辨率？ 影响分辨率的因素：K’，a，N 分辨率的方程∶ k 是容量因子，表达了样品与柱填料的作用强弱。 a 是选择性系数，描述两化合物分离的好坏程度。是化学因素。 N 是理论塔板数，描述色谱峰的谱带展宽程度。 色谱柱的柱效 N 用“切线”法计算柱效 用“5?”法计算柱效 提高柱效的方法 色谱柱本身 减小填料的颗粒度 找到最佳的流速(根据不同内径) 合适的温度 降低溶剂的粘度 增加柱长 其他影响柱效的因素 柱外效应 连接管路 进样器、检测器 进样体积 进样量 容量因子 k 改变k值的方法∶ 调节流动相的极性、pH、离子强度等 梯度淋洗 选择性系数 a 定义∶ a =1 时两组分分不开， 改变a的途径 改变固定相 改变流动相 改变温度 改变样品的本身性质 a ，k，N∶如何控制分辨率? 液相色谱的检测模式 色谱条件的优化 开发液相色谱方法 分辨率是色谱分离中主要考虑的因素 在开发色谱方法时，有很多因素是很重要的。除分辨率之外，以下几个因素都要考虑。 灵敏度 载样量 分析速度 溶剂损耗 问题∶什么样的分离结果是好的?分辨率? 分辨率的公式： 理论塔板数计算公式： W s 方法 Wtan 16 切线法 Wh 5.54 半峰高 W3s 9 3s W4s 16 4s W5s 25 5s Inject Inject 不好的色谱柱的柱效反而比好色谱柱的要高，因为其拖尾部分测不出来 Good Column Bad Column Inject Inject 与峰高的关系 与R的关系 灵敏度、选择性、及适应能力 成本 容易使用 色谱柱寿命 效率