不同纳米材料的侧流免疫层析技术在真菌毒素检测中的应用.docVIP

　不同纳米材料的侧流免疫层析技术在真菌毒素检测中的应用 　　1引言 　　侧流免疫层析检测技术(LFIA)也称横向流动免疫检测技术，是出现于20世纪60年代初期的一种独特的免疫分析方式，以条状纤维层析材料为固相，借助毛细管的吸附作用使样品在层析材料上移动，其中样品中的待测物与层析材料上一定区域的抗体结合，通过酶促显色反应或直接使用着色标记物短时间获得直观的测试结果。1990年，Begg、等最先将其用于人绒毛膜促性腺激素(HCG)的测定，随后该技术逐渐在环境监控、食品安全临床诊断等领域得到广泛应用，同时该技术也用于动物用药、农药残留霉菌毒素等污染物以及核酸、蛋白等生物大分子的检测领域。 　　真菌毒素(Mycotoxins)是由真菌产生的次级代谢产物，主要包括黄曲霉毒素(Aflatoxins， AFs) ,脱氧雪腐镰刀菌烯醇( Deoxynivalenol，DON ) ,储曲霉毒素A ( OchratoxinA ，OTA )、玉米赤霉烯酮( Zearalenone ，ZEN )、伏马毒素(Fumonisins ， FBs)等，对人和动物的毒性主要有致癌、致畸、致突变、肝细胞毒性、中毒性肾损害、免疫抑制和生殖紊乱等。这些真菌毒素会污染农作物，植物及其副产品等，进而给人类和家畜健康带来威肋、。世界各国对农产品、食品和饲料中的真菌毒素的含量做出了严格规定。 　　目前，最常见的真菌毒素测定方法有仪器分析法和免疫分析法等。常用仪器分析法主要有高效液相色谱法(HPLC)和色谱领谱法。仪器分析法作为常规真菌毒素检测方法，因其灵敏度高，结果准确可靠而受到检测机构的青睐，其缺点是:需要对样品进行较为繁琐的预处理;需要具有专业实验技能的人员操作;仪器昂贵精密，且所用仪器的检测费用和维修费用昂贵，无法满足批量样品的快速筛查检测。随着特异性抗体技术的发展，免疫相关方法得以迅速发展，逐渐成为毒素检测的新趋势。侧流层析免疫检测技术具有简便、快速、灵敏、经济等优点，特别适合于大批量样本的检测。本文简要介绍了侧流免疫层析检测技术，并且列举出其在真菌毒素快速检测中的应用进展。 　　2侧流免疫层析检测技术 　　侧流免疫层析技术是一种将免疫技术和色谱层析技术相结合的快速免疫分析方法，主要用于病原体，激素，药物和代谢物等的检测，原理是通过标记抗原或抗体来识别待检物。侧流免疫层析试纸条主要包括样品垫、结合垫、层析膜、吸收垫、背衬及应用于试纸条上的各种试剂。根据待检测物分子的大小不同分为两种主要类型:双抗体夹心法和竞争法。 　　2.1双抗体夹心法 　　双抗体夹心实验法是利用捕获抗体和检测抗体进行测定。一般用于检测大分子量的抗体、抗原类物质。大分子量分析物包含有两个或两个以上的结合位点，结合垫为着色标记物与待测抗原的特异性抗体(Ab1)的偶联物，检测线为待测抗原的另一表位特异性抗体(Ab2)质控线为抗Ab，抗体(Ab 3 )。当待测样品中含有一定量的抗原时，样品通过层析作用到达结合垫位置，抗原和Ab，发生反应，与检测线的抗体形成双抗体夹心复合物，达到一定量后，通过沉积的标记物显示待检物的量。残留的抗体继续泳动到质控线位置，与Ab3反应而显色，得到阳性结果。样品中不含抗原，标记物和检测线抗体不发生反应，而质控线显色，得到了阴性结果。检测线和质控线均不显色时，表示试纸条无效。 　　2. 2竞争法 　　小分子量分析物只有一个抗体结合位点，使用竞争免疫试验进行检测。竞争法有两种类型，一种是检测区固化的是待测抗原或待测抗原的类似物。结合垫上为着色标记物与待测抗原的特异性抗体(Ab1)的偶联物。当样品中含有待测抗原，样品待检测抗原与Ab，结合，由于竞争抑制作用，检测线处抗原不再发生反应，检测线处不显色，随后，抗原抗体复合物与抗Ab，抗体Ab2相结合，在质控线处显色。反之，随着抗原浓度的显色加深。另一种在检测区固化的是待测抗原的特异性抗体(Ab1 ) 。结合垫上为着色标记物和待测抗原或待测抗原类似物偶联物。通过样品中抗原和抗原偶联标记物竞争结合检测线上抗体，达到检测的目的。 　　3侧流免疫层析技术在真菌毒素检测中的应用 　　侧流免疫层析是一种将免疫技术、色谱层析技术和免疫标记技术相结合的固相膜免疫分析方法，这种层析技术常常是借助外来的标记物获得可测量的信号来分析结果。因此，有必要寻求一种高灵敏的免疫标记物，建立准确、快速、简便的真菌毒素检测方法。 　　纳米粒子一般是指颗粒尺寸在1 ~ 100 nm范围内的超微粒子。它具有表面效应、小尺寸效应、量子效应、宏观量子隧道效应等特性。与正常粒子相比，纳米粒子具有大的比表面积，其光、热、磁敏感特性和表面稳定性较高。同时，纳米材料用于生物分析标记物质，