供者型CIK 细胞输注对清除异基因造血干细胞移植后微小残留病灶的功效.docVIP

供者型CIK 细胞输注对清除异基因造血干细胞移植后微小残留病灶的功效 　　异基因造血干细胞移植(allogeneic stem cell transplantation，allo-HSCT) 是可治愈血液系统恶性肿瘤的手段。然而，复发仍是导致移植失败的主要原因。且复发难治病例疗效差，病死率高，仍是临床面临的难题。移植后密切监测微小残留病灶(minimal residualdiseases，MRD) 可早期发现疾病复发，通过减停免疫抑制剂或供者淋巴细胞输注等处理，常可使患者再次达分子生物学缓解。但是，治疗后反应率低及急性移植物抗宿主病( acute graft-versus-host disease，aGVHD) 是导致治疗失败的主要原因。细胞因子诱导的杀伤( cytokine induced killer，CIK) 细胞是一组以CD3 +CD56 + T 细胞为主要效应细胞的异质细胞群，可通过非特异性免疫杀伤作用清除肿瘤患者体内微小残留病灶。传统的DLI 效果并不理想，allo-HSCT 后联合供者型CIK 细胞治疗复发难治血液肿瘤国内外已有报道。本研究就10 例在allo-HSCT 后出现分子生物学复发( 7 例) 以及形态学复发( 3 例) 后经减停免疫抑制剂、化疗、供者淋巴细胞输注等治疗后形态学缓解，但MRD 仍阳性的患者，输注供者型CIK 细胞，并对其进行安全性及有效性的研究。 　　1 资料与方法 　　1. 1 病例资料 　　收集我科2012 年11 月至2015 年11 月共10 例患者，其中男性9 例，女性1 例，中位年龄24. 5(10 ～41) 岁。急性淋巴细胞白血病5 例，急性髓系白血病4 例，慢性粒单细胞白血病1 例。移植前复发或未达完全缓解( complete remission，CR) 6 例，CR4 例( 其中2 例CR1、2 例CR2) 。 　　1. 2 移植方式 　　9 例均为清髓性骨髓+ 外周血allo-HSCT，1 例为清髓性非血缘脐血移植。单倍体移植6 例，同胞全相合移植2 例，同胞7 /10 相合1 例，非血缘脐血全相合1 例。急性淋巴细胞白血病患者预处理方案为TBI /Cy: TBI + CTX + ATG，急性髓系白血病及慢性粒单细胞白血病患者预处理方案为改良的Bu /Cy: Bu + CTX +Ara-C + ATG。 　　1. 3 移植后复发及治疗 　　移植后每月行骨髓形态、活检，并通过流式细胞仪或PCR 监测MRD。分子生物学复发经减停免疫抑制剂或供者淋巴细胞回输(donor lymphocytes infusion，DLI) 治疗，骨髓形态学复发患者行减停免疫抑制剂、化疗、化疗+ DLI 治疗，治疗后评估疗效，形态学缓解但仍MRD 阳性患者行CIK 治疗。 　　1. 4 CIK 细胞采集、扩增及检测 　　采集供者外周血单个核细胞悬液80 ～ 120 mL，脐带血移植患者采集的是移植后患者的外周血(完全植入，供者型)。分离并洗涤后，调整细胞密度至1 times;106 /L，转移至培养瓶中，加入适量RPMI1640 培养液、自体血浆和细胞因子IL-2、IFN-gamma;、OKT3成为细胞悬液，在37 ℃、5% CO2条件下悬浮培养，于培养第4、7、10、13 天分别调整细胞密度，补充IL-2，同时进行细胞表型分析。培养结束后，流式细胞仪通过检测细胞的表面标志物鉴定CIK 细胞的表型; 并于细胞回输前计数CIK 细胞; 同时进行细菌、真菌学检测。 　　1. 5 CIK 细胞回输 　　CIK 细胞自培养基收集后制成细胞悬液，6h 内回输，输注时间30 min 左右。回输时行CIK 细胞表型鉴定、细胞活力检测及细胞计数。于培养第10 ～ 14 天通过静脉途径回输。 　　1. 6 不良反应及疗效观察 　　所有患者治疗前常规检查血常规、肝肾功能及心电图，治疗过程中严密监测患者心率、血压及血氧饱和度监测，发热时给予物理降温。治疗每个月随访血常规、肝肾功及微小残留病灶和骨髓形态、活检。 　　2 结果 　　2. 1 移植后复发及治疗 　　10 例患者大部分原发病为复发难治性，移植后均达血液学和分子生物学缓解，规律监测MRD。7 例出现分子生物学复发，经DLI 或减停免疫抑制剂治疗后MRD 仍为阳性。3 例患者形态学复发，其中1 例因复发时仍有明显胃肠道GVHD，减停免疫抑制剂后原始粒细胞自10. 5%下降至4%，达形态学缓解，未进一步化疗及DLI 等治疗; 另2 例分别给予化疗、化疗+ DLI后达完全缓解，但3 例患者MRD 阳性。CIK 细胞治疗前所有患者