关于十三味马钱子丸中士的宁和马钱子碱的测定.docVIP

关于十三味马钱子丸中士的宁和马钱子碱的测定 　　十三味马钱子丸由马钱子、藏木香、宽筋藤、悬钩木、干姜、诃子、沉香、肉豆蔻、木香、广枣、安息香、绿绒蒿、藏茜草十三味中藏药组成，收载于《卫生部药品标准》藏药第一册。其主要成分为毒性药材马钱子，因马钱子治疗剂量与中毒剂量较接近，应对马钱子中的主要毒性成分士的宁和马钱子碱的含量进行检测。采用HPLC 对含马钱子制剂中士的宁和马钱子碱含量测定研究有较多文献报道，但目前尚无十三味马钱子丸制剂中士的宁和马钱子碱含量测定的研究文献。本实验研究建立了HPLC 测定十三味马钱子丸中士的宁和马钱子碱的测定方法，可做为修订该制剂质量标准的参考依据。 　　1 仪器与试药 　　LC-2010A 高效液相色谱仪(日本岛津)，士的宁对照品(批号：110705-200306)、马钱子碱对照品(批号：110706-200505)均由中国药品生物制品鉴定所提供。十三味马钱子丸(青海通天河藏药制药有限公司提供，批号西藏金珠雅砻藏药有限责任公司提供，批号：110101、110102、110103)。乙腈为色谱纯，水为重蒸馏水，其余为分析纯。 　　2 方法与结果 　　2.1 色谱条件 　　色谱柱为DikmaC18(4.6 mmtimes;250 mm，5 mu;m);以乙腈-0.01mol/L 庚烷磺酸钠与0.02mol/L磷酸二氢钾等量混合溶液( 用10% 磷酸调节pH 值2.8)(10∶90)为流动相，峰形及保留时间均比较理想;检测波长：260 nm;柱温：30℃;流速：1 mL/min;进样量：10 mu;L。 　　2.2 溶液制备 　　2.2.1 对照品溶液的制备精密称取士的宁对照品约6 mg，置10 mL 量瓶中，加三氯甲烷适量使溶解并稀释至刻度，摇匀。精密量取2mL，置10mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得( 实际含量为每1 mL 中含士的宁0.131 mg)。精密称取马钱子碱对照品约5 mg，置10 mL 量瓶中，加三氯甲烷适量使溶解并稀释至刻度，摇匀。精密量取2 mL，置10 mL 量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得(实际含量为每1 mL 中马钱子碱0.086 mg)。 　　2.2.2 供试品溶液的制备取本品适量，研细，取约3g，精密称定，加15 mL氢氧化钠试液，混匀，放置1 小时，精密加三氯甲烷25 mL，称定质量，超声处理(功率120 W，频率40 kHz)30 分钟，放冷，再称定质量，用三氯甲烷补足减失的质量，置分液漏斗中，分取三氯甲烷层，用铺有少量无水硫酸钠的滤纸滤过，精取10 mL 三氯甲烷液，置25 mL 量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过，即得。 　　2.2.3 阴性样品溶液的制备按处方比例及制备工艺，配制不含马钱子的阴性对照样品，并按上述供试品溶液的制备方法制成阴性对照溶液。 　　2.3 专属性实验 　　取对照品溶液、供试品溶液与阴性对照溶液，分别按上述色谱条件进行测定，样品与对照品在同一保留时间有相同的波峰出现，而空白溶液则无相应的波峰。样品、对照品、阴性对照高效液相色谱图1。 　　2.4 线性关系考察 　　精密吸取上述士的宁对照品溶液(0.131mg/mL)2、4、6、8、10 mu;L，按上述色谱条件分别注入液相色谱仪，以对照品的进样量为横坐标，相应的峰面积积分值为纵坐标，计算回归方程：C=5.393 69times;10-7A+2.570 23times;10-3，r=0.999 8，士的宁在0.262～1.310 mu;g 内有良好的线性关系。精密吸取上述马钱子碱对照品溶液(0.086 mg/mL)2、4、6、8、10 mu;L，按上述色谱条件分别注入液相色谱仪，以对照品的进样量为横坐标，相应的峰面积积分值为纵坐标，计算回归方程：C=7.347 71times;10-7A-0.0113 5，r=0.999 5，马钱子碱在0.172～0.860 mu;g 内有良好的线性关系。 　　2.5 精密度实验 　　分别精密吸取士的宁对照品溶液与马钱子碱对照品溶液各10 mu;L，按上述色谱条件测定，各进样6 次，测定峰面积积分值，士的宁对照品溶液RSD 为2.11%，马钱子碱对照品溶液RSD 为2.80%。 　　2.6 稳定性实验 　　取同一供试品溶液，分别在0、2、4、6、8 小时，按上述色谱条件各进样一次，每次10 mu;L，结果士的宁、马钱子碱在8 小时内稳定。RSD 分别为1.03%、2.90%。 　　2.7 重复性实验 　　精取同一批供试品6 份，按上述供试品溶液制备方法和色谱条件重