大黄配伍药对的蒽醌含量及其紫外谱线组图谱变化讨论.docVIP

大黄配伍药对的蒽醌含量及其紫外谱线组图谱变化讨论 　　临床上通常将大黄与其他药味配伍使用，但同样是应用大黄，不同药对配伍却使得大黄有着不同方向的功用，这种配伍作用的变化除了与病症的不同产生差异外，还与大黄中的蒽醌类成分含量变化密不可分。大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚、芦荟大黄素为大黄中主要的蒽醌类化合物，以游离型与结合型两种形式存在。 　　目前报道的对大黄配伍研究主要侧重于大黄配伍前后化学成分含量及药效的变化，是单指标、非同步的，未能反映大黄在不同配伍当中体现的共性关系和各项指标的相关性。本次实验选取大黄经典组方“大承气汤、泻心汤、大黄牡丹汤、桃核承气汤和大陷胸汤”中的药对“大黄枳实、大黄黄连、大黄牡丹、大黄桃仁和大黄甘遂”进行配伍前后蒽醌类成分含量变化的试验研究，系统、同步地对大黄药对配伍作用的共性关系进行初步研究探索。 　　1 仪器与材料 　　1. 1 仪器UV - 1800 型紫外分光光度计( 日本岛津公司) 。 　　1. 2 试剂和材料中药饮片生大黄( 甘肃 、枳实( 江西， 120901) 、黄连( 四川， 120901) 、牡丹皮( 安徽， 1202188) 、桃仁( 河北， 2903070) 、醋甘遂( 陕西， 1312316) 。生大黄、牡丹皮及醋甘遂购于广西万宝堂药业有限公司，枳实、黄连及桃仁购于广州至信中药饮片有限公司。1，8- 二羟基蒽醌对照品( 中国药品生物制品检定所， 0829 - 9702) 。水为去离子水，所用试剂均为分析纯。 　　1. 3 药对提取液的制备大黄用10 倍量水浸泡30min 后加热至微沸，控制微沸状态继续煎煮20min，滤布过滤，即得大黄水提液供试品; 五个药对大黄枳实、大黄黄连、大黄牡丹、大黄桃仁、大黄甘遂分别按大承气汤、泻心汤、大黄牡丹汤、桃核承气汤和大陷胸汤中的1∶ 1、1∶ 1. 5、1∶ 0. 25、1∶ 1、1∶ 0. 1 的药物剂量比例加10 倍量水先浸泡30min 后加热至微沸，控制微沸状态继续煎煮20min，滤布滤过，即得各药对水提液。 　　1. 4 对照品溶液的制备精密称取经105℃干燥至恒重的1，8-二羟基蒽醌标准品5mg，置于100ml 容量瓶中，用醋酸镁甲醇溶液定容至刻度，备用。 　　2 方法与结果 　　2. 1 检测波长的确定取“1. 4”项下对照品溶液2ml，置于10 ml容量瓶中用醋酸镁甲醇溶液定容至刻度，摇匀。以相应溶剂为空白对照，选定200 ～ 600nm 波长范围进行紫外扫描，见图1。结果表明1，8- 二羟基蒽醌的最大吸收波长为510nm，故实验选定510nm 作为检测波长。 2. 2 标准曲线的建立精密吸取“1. 4”项下对照品溶液1. 0，1. 5，2. 0，2. 5，3. 0，3. 5 ml 分别置于10 ml 容量瓶中，醋酸镁甲醇溶液定容至刻度，摇匀。以醋酸镁甲醇溶液为空白对照，于510nm 检测波长处测定其吸光度，以浓度X 为横坐标，吸光度Y为纵坐标得直线回归方程: Y = 49. 051X - 0. 0002，r = 0. 9984。结果表明，在0. 0050 ～ 0. 0175mg·ml - 1 范围内，吸光度与浓度呈良好的线性关系。 　　2. 3 供试品溶液的制备 　　2. 3. 1 总蒽醌含量的测定精密量取“1. 3”项下各药对水提液5ml 分别置烧瓶中，加8%盐酸溶液10ml，超声处理2min，再加三氯甲烷10ml，加热回流1h，放冷，置分液漏斗中，用少量三氯甲烷溶液洗涤容器，并入分液漏斗中，分取三氯甲烷层，酸液再用三氯甲烷萃取2 次，每次10ml，合并三氯甲烷液，减压回收溶剂至干，残渣加醋酸镁甲醇使溶解，转移至10ml 量瓶中，加1% 醋酸镁甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。 　　2. 3. 2 游离蒽醌含量的测定精密量取“1. 3”项下各药对水提液5ml 分别置烧瓶中，加三氯甲烷10ml，置分液漏斗中，用少量三氯甲烷洗涤容器，并入分液漏斗中，分取三氯甲烷层，酸液再用三氯甲烷萃取2 次，每次10ml，合并三氯甲烷液，减压回收溶剂至干，残渣加1%醋酸镁甲醇使溶解，转移至10ml 量瓶中，加醋酸镁甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。 　　2. 4 方法学考察 　　2. 4. 1 精密度试验精密吸取“1. 3”项下大黄及大黄五个药对供试品溶液5ml，分别按“2. 3. 1”项及“2. 3. 2”项下方法制备供试品溶液。于510nm 波长处分别连续测定6 次，测得总蒽醌及游离蒽醌吸光度RSD 均小于0. 5，结果表明该方法精密度良好。 　　2. 4. 2 稳定性试验精密吸取“1. 3”项下大黄及大黄五个药对供试品溶液5m