ChgODN的免疫刺激作用.pptVIP

Chg.-ODN的免疫刺激作用 CPG概念 为非甲基化的胞嘧啶鸟嘌呤二核苷酸重复序列，即CpG 基序。 一种免疫佐剂 作用靶点TLR9 细胞免疫，体液免疫 Th1免疫应答 慢性乙型肝炎患者细胞免疫低下 HBV免疫耐受，持续感染 肿瘤微小残留病的清除 CPG提高PBMC中Th1细胞 CPG提高PBMC中Th1 、Tc1细胞百分率 CPG刺激BPMC分泌细胞因子 CPG诱导PBMC杀伤靶细胞 收集CPG活化的PBMC 细胞毒性实验：效应细胞为CPG活化的PBMC；靶细胞为CFSE预染的K562细胞。对照组效应细胞为未经CPG活化的PBMC。 效：靶＝20：1，混合培养2h。流式细胞术检测靶细胞死亡率。 CPG诱导PBMC杀伤靶细胞 CFSE染色靶细胞 浓度为5μmol/ L 的CFSE （2羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯）工作液 取对数生长期的靶细胞浓度108/ L 细胞悬液与等体积CFSE 工作液混合 37 ℃孵育10 min。 离心洗涤两次后 悬浮细胞备用 CFSE染色靶细胞 实验结果 CpG活化PBMC对K562细胞的杀伤作用(N=5) CPG活化PBMC 　　16.85±5.14 % 　　对照组　　　　8.62±2.83 % CIK细胞杀伤靶细胞 CIK细胞杀伤靶细胞 研究背景 通过主动免疫、过继特异性免疫、过继非特异性免疫等方式，清除慢性乙肝患者体内残存的HBV，达到治疗效果。 研究背景 B淋巴细胞具有抗原递呈细胞的性质，同时具有CpG-ODN受体：TLR-9。本研究探讨CpG-ODN诱导B淋巴细胞成为高效APC，使之具有类似于树突状细胞功能的可行性。 TOLL受体 TOLL受体在血细胞中的表达 活化B细胞负载核心抗原 磁珠分选B淋巴细胞 CPG活化B淋巴细胞 核心抗原肽:FLPSDFFPSV-FITC 流式细胞仪、荧光显微镜检测抗原负载状况 磁珠分选B细胞 活化B细胞负载抗原肽 活化B细胞负载核心抗原 APC与T细胞作用机制 CPG对B细胞抗原递呈相关分子的作用研究 CpG2006、2216由上海生物工程技术服务有限公司合成，全硫代化修饰 对照组为含10%FCS的RPMI1640＋外周血PBMC，细胞量107/孔，37℃、5%CO2、48小时 实验组加入CpG2006或CpG2216，终浓度均为1umol/mL，余同上 CpG提高淋巴细胞CD69表达 B细胞CD80、CD86表达 CpG提高B细胞表面CD80、CD86的表达 B细胞MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ表达 CpG提高B细胞表面MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ的表达 活化B细胞诱导CTL 负载了抗原的活化B细胞与淋巴细胞混合培养(含IL-2的RPMI1640培养液). 收集细胞,以五聚体技术检测HBV特异性CTL. 实验组特异性CTL为0.50±0.19%，对照组为0.20±0.10%。 特异性CTL诱导 结论 CpG能够活化B细胞，对T细胞无明显的作用 CpG能够提高B细胞表面抗原递呈相关分子的表达 CPG诱导PBMC产生高水平的IFN-γ CPG诱导淋巴细胞向Th1、Tc1分化 CPG增强PBMC对K562细胞的杀伤作用 通过B细胞介导, CPG可诱导特异性CTL Pro5TM MHC Pentamers检测对照组和实验组HBcAg18-27抗原特异性CTL（Q2-1区）。前者为对照组（未加APC），后者为实验组（加APC）。 * * Th1占淋巴细胞百分比 * * *：与对照组比较，P0.05 * *：与对照组比较，P0.05 * *：与对照组比较，P0.05 分选前B细胞 7.89% 分选后B细胞 89.6% 荧光显微镜观察B细胞负载HBcAg18-27肽 T淋巴细胞 B淋巴细胞 CD69表达率（%） * * *：与对照组比较，P0.05 对照组 加CPG-ODN组 加CPG-ODN组 CD80 　　 CD86 CD80、CD86表达率（%） * * * * *：与对照组比较，P0.05 对照组 加CPG-ODN组 MHC-Ⅰ　　　　　　　　MHC-Ⅱ MHC表达量（MFI） * * * * *：与对照组比较，P0.05