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microbe培养基的制备和高压蒸汽灭菌
培养基的制备和高压蒸汽灭菌 目的与要求 1、了解培养基的配制原理,掌握制备培养基的过程。 2、学习高压蒸汽灭菌操作技术。 3、初步掌握划线和涂布平板的技术。 4、了解抗生素对细菌的抑制作用。 培养基的配制过程 计算用量:200ml固体培养基 称量:托盘天平 溶解:自来水 调pH:自然pH 灭菌: 一般培养基, 121 0C, 15-30min:20min; 含糖培养基: 112 0C, 15-30min; 易产生沉淀的物质:分别灭菌后再混合 倒平板 灭菌 灭菌(Sterilization)是指利用物理、化学等手段杀灭一切微生物的营养体、芽孢和孢子的过程。 倒平板 平板划线的基本程序 连续划线法 每组4人 需要灭菌的东西: 固体培养基200ml(2g蛋白胨,0.6g牛肉膏,1gNaCl,4g琼脂,自来水200ml,自然pH) 培养皿10个(每人倒平板两个,一个划线,一个涂布;涂布的那个用于抑菌圈实验) 1ml移液管4支(每人1支) 滤纸片,每人两片,每组需剪10片,装入培养皿中灭菌 思考题 1、总结一下,配制培养基应注意哪些问题。 2、高压灭菌的关键是什么? 3、加入青霉素滤纸的涂布平板究竟会产生什么样的效果,为什么? (1)加入适量自来水于灭菌锅中(至水位线)。 (2)放入需要灭菌的东西。 注意:不要摆得太挤,以免影响蒸汽流通和灭菌效果。 (3)加盖旋紧螺旋,使蒸汽锅密闭不漏气(对角线均匀拧旋) (4)打开放气阀,打开电源,自开始产生大气后5分钟(此时蒸汽锅内的冷空气由排气阀排尽),关紧放气阀,让温度随蒸汽压力上升而上升,当达所需压力时(即温度上升到121℃),控制热源维持所需时间(20分钟),然后停止加热,让其自然冷却。 注意:应用此法灭菌是否彻底的一个重要关键是在压力上升之前,必须将锅内的冷空气完全排尽。 (5)待压力降至0磅时,打开排气阀,再打开锅盖,取出灭菌物。 注意:压力未降至0磅时,切勿打开锅盖,否则突然降压,招致培养基沸腾,沾湿棉塞,甚至冲出管外。 * * 2007.11 配培养基 灭菌、倒平板 划线、涂布平板 抑菌圈实验 实验流程 任何培养基一旦配成,必须立即进行灭菌处理 培养基 培养基(medium):由人工配制的适合微生物生长、繁殖或适合积累代谢产物的营养基质。 在微生物学研究和生长实践中,配置合适的培养基是一项最基本的要求。 培养基 按化学成分来分类 按物理状态来分类 按功能进行分类 天然培养基 合成培养基 半合成培养基 固体培养基 液体培养基 半固体培养基 脱水培养基 基础(本)培养基 营养(加富)培养基 完全培养基 选择培养基 鉴别培养基 3g/L 牛肉膏 10g/L 蛋白胨 5g/L NaCl 2% 琼脂粉 灭菌方法 化学药品灭菌 辐射灭菌 过滤除菌 加热法 干热灭菌 湿热灭菌 火焰灼烧 热空气灭菌 煮沸消毒法 常压蒸汽灭菌法 高压蒸汽法 高压蒸汽灭菌锅的构造 高压蒸汽灭菌锅的使用 待灭菌物品的包扎 装锅、加水 加盖 (对角线均匀拧旋) 升温、排气(放大气5min) 恒温 切断电源、冷却 开锅取物 121℃ 20min 融化的琼脂培养基,冷却至50℃左右(以手背能忍受的温度为准) 灭菌接种环 沾取菌液 接种 灭菌接种环 杀灭接种环沾染的细菌,以免污染标本 杀灭接种环沾染的细菌,以免污染环境 灭菌过的移液管 吸取菌液0.1ml滴在培养皿中央 用灭菌的涂布棒均匀涂布: 将菌悬液先沿一条直线轻轻地来回推动,使之分布均匀, 然后改变方向沿另一垂直来回推动,平板内边缘处可改变方向用三角玻扒再涂布几次。 三角铁扒 平板涂布的基本程序 涂布好的平板 滤纸片 抑菌圈实验 青霉素 具体操作步骤:
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