桔梗多糖的提取及其抑菌活性研究.docVIP

桔梗多糖的提取及其抑菌活性研究 　　桔梗(Rehmannia glutinosa)为玄参科植物，是传统的药食同源物品，最早出典于《神农本草经》。桔梗富含多糖、桔梗苷、二氢梓醇苷、桃叶珊瑚苷及多种维生素及氨基酸。多糖类化合物是桔梗中的一类重要活性成分，具有抑菌、降低血糖、止血、抑制肿瘤生长，抗炎、抗肝损害、调节机体免疫等功能。试验对桔梗多糖的响应面提取工艺进行优化，并对其抑菌活性进行研究，以期为桔梗的综合利用提供理论基础。 　　1 试验材料与方法 　　1.1 原料与试剂 　　桔梗：市售，洗净后在40 ℃干燥;葡萄糖、磷酸盐缓冲液、苯酚、浓硫酸、无水乙醇、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、枯草芽孢杆菌、黑曲菌和啤酒酵母，实验室提供。 　　1.2 试验仪器与设备 　　JP300G 超声波提取设备;GZX-9070 电热恒温鼓风干燥箱;AL104 电子分析天平;RE-52A 旋转蒸发仪;LE400 恒温水浴锅;THZ-C 恒温振荡器;YXQ.SG41.280 手提式压力蒸气灭菌器等。 　　1.3 试验方法 　　1.3.1 工艺流程 　　桔梗rarr;粉碎rarr;提取rarr;过滤rarr;离心rarr;浓缩rarr;醇沉rarr;浓缩干燥rarr;粗多糖rarr;含量测定rarr;抑菌性质研究 　　1.3.2 标准曲线的绘制 　　准确称葡萄糖0.100 2 g 定容至100 mL，再稀释成10，20，40，60，80和100 mg/L的系列标准溶液。溶解蒽酮0.2 g于100 mL 95%硫酸中，置棕色瓶中冷暗处保存。分别取0.2 g/L标准葡萄糖液0，0.1，0.2，0.3，0.4和0.5 mL用蒸馏水补足1 mL，分别加入4 mL2 g/L温暗处放10 min，于600 nm处用比色皿比色，以对照样品浓度为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线。得到标准曲线的回归方程为：y=0.027x-0.083，R2=0.999 8， x指标准品的质量浓度(mg/L)， y指吸光度。 　　1.3.3 桔梗多糖提取量的测定 　　试验采用苯酚-硫酸法测定桔梗多糖含量。称量桔梗粉末(过60目筛)，按一定液料比值加入蒸馏水，在一定温度微波提取一定时间，提取液4 000 r/min离心10 min后取上清液，上清液用旋转蒸发仪浓缩到10 mL，然后加入3倍体积80%的乙醇溶液浸提12 h，弃去上清液，沉淀加水溶解并定容至250mL。吸取0.5 mL测定多糖的含量，即为多糖提取率。 　　2 结果与分析 　　2.1 桔梗多糖提取条件的优化试验 　　2.1.1 液料比值对桔梗多糖提取效果的影响 　　设定超声波功率为300 W，超声波时间为45 min，乙醇体积分数为85%，分别在液料比值为5，10，15，20，25和30(mL/g)6个梯度下提取多糖。由图1可以看出，液料比值应控制在20(mL/g)左右较为适宜。 　　2.1.2 乙醇体积分数对多糖提取效果的影响 　　设定超声波功率为300 W，超声波时间为45min，液料比值为20(mL/g)，分别在乙醇体积分数为70%，75%，80%，85%，90%和95% 6个梯度下提取桔梗多糖。由图2可以看出，乙醇体积分数在85%左右较为适宜。 　　2.1.3 超声功率对桔梗多糖提取效果的影响 　　设定乙醇体积分数为85%，超声波时间为45 min，液料比值为20(mL/g)，分别在超声波功率为200，250，300，350，400和450 W 6个梯度提取桔梗多糖。 　　2.1.4 提取时间对桔梗多糖提取效果的影响 　　设定乙醇体积分数为85%，超声波功率为300W，液料比值为20(mL/g)，分别在超声波时间为30，35，40，45，50和55 min 6个梯度下提取桔梗多糖。 　　3 结论 LnYnQ 　　超声辅助提取桔梗多糖的最佳提取工艺条件为超声功率250 W，提取时间为45 min，乙醇体积分数为85%，液料比值为15(mL/g)。此试验条件下桔梗多糖提取率为8.01 mg/g。同时对桔梗多糖抑菌谱的测定活性进行研究，结果表明其具有较宽的抗菌谱。桔梗多糖对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的MIC为6.25%，对沙门氏菌的MIC为12.5%，对枯草芽孢杆菌、黑曲菌和啤酒酵母的MIC为25%。