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检验蒙成药海鲁木勒－9 中红花的含量 　　海鲁木勒-9，又名哈敦海鲁木勒九味丸，收载于《中华人民共和国药品标准·蒙药分册》，由五灵脂、红花、甘松、白豆蔻等九味药组成，具有清血热，止泻作用。用于“协日”热，腹痛血痢，胃肠下痢等的治疗。蒙药是民族医药的重要组成部分，建立蒙药的质量标准有助于推动蒙医药事业的现代化发展，也可为临床用药提供更多参考。目前尚没有关于海鲁木勒-9 质量控制的报道。红花为方中的主要成分，且原标准中没有薄层鉴别和含量测定项目，故采用薄层色谱法对海鲁木勒-9 中的红花进行鉴别，用反相高效液相色谱法测定红花的有效成分羟基红花黄色素A 的含量。所用方法成熟高效，精确稳定，可以作为海鲁木勒-9 的定性定量方法。用现代化手段对传统药物进行研究不仅可完善其质量标准，亦可使其更易于被大众接受。 　　1 仪器与试药 　　1. 1 仪器 　　Ag ilent1100 液相色谱仪; BSA 124 S 型十万分之一电子天平( 赛多利斯科学仪器有限公司) ; KQ5200 E 型超声波清洗器( 200W，40KHZ) ( 昆山市超声仪器有限公司)。 　　1. 2 试药羟基红花黄色素A 对照品( 购自中国食品药品检定研究院，批号: 111637 - 200503，纯度:96. 5%) ; 海鲁木勒-9( 内蒙古库仑蒙药厂，批号:090315， 090316， 090317，规格每10 粒重2g) ; 硅胶G( 青岛海洋化工厂) ; 甲醇为色谱纯; 水为纯化水;其他试剂均为分析纯。 　　2 红花的薄层鉴别 　　取海鲁木勒-9 药材粉末0. 6g，加80% 的丙酮水溶液5mL，超声处理40min，滤过，取上清液作为供试品溶液; 取不含红花的阴性样品同法制成阴性样品溶液; 取适量羟基红花黄色素A 对照品，加80%的丙酮制成0. 014mg /mL 的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法( 《中国药典》2010 年版一部附录ⅥB) 试验，吸取上述三种溶液各5mu;L 分别点于同一硅胶G 薄层板上，以正丁醇-甲酸-水( 7 ∶2 ∶6) 为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2% 三氯化铁乙醇溶液，自然光下检视。结果显示供试品与对照品在相同位置有相同颜色的斑点，而缺红花的阴性样品在此位置无斑点。 　　3 含量测定 　　3. 1 溶液的制备 　　3. 1. 1 对照品溶液的制备精密称取羟基红花黄色素A 对照品2. 55mg，置25mL 容量瓶中，加25%甲醇至刻度，摇匀，即得102mu;g /mL 的溶液，过0. 45mu;m 滤膜备用。 　　3. 1. 2 供试品溶液的制备取本品约0. 5g，精密称定，置具塞三角瓶中，精密加入25% 甲醇水溶液50mL，称定其重量，超声处理40min，放冷，再称定重量，用25% 甲醇水溶液补足减失的重量，摇匀，过0. 45mu;m 滤膜，即得。 　　3. 1. 3 阴性样品溶液的制备按海鲁木勒-9 处方组成及生产工艺制备缺少红花的阴性样品，按3. 1. 2 所述供试品溶液制备方法制备缺红花的阴性样品溶液，过0. 45mu;m 滤膜备用。 　　3. 2 色谱条件及系统适用性试验 　　色谱柱: 依利特ODS 柱( 250mmtimes;4. 6，5mu;m) ;流动相: 甲醇～ 0. 5% 乙酸( 15 ∶85) ; 进样量20mu;L;检测波长: 403nm; 柱温: 25℃; 分别取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照品溶液各20mu;L，测定，结果表明: 在此最优色谱条件下，羟基红花黄色素A 与其他组分色谱峰可达基线分离，峰形良好，且阴性样品无干扰。 　　3. 3 线性关系考察 　　精密吸取3. 1. 1 项下对照品溶液( 102mu;g /mL)0. 1，0. 2，0. 5，1. 0，1. 5，2. 0mL，分别置于10mL 容量瓶中，加25%甲醇水溶液稀释至刻度，摇匀。按3. 2项下色谱条件分别进样，进样量20mu;L，积分峰面积，分别以浓度( mu;g /mL) 及峰面积为横纵坐标，绘制标准曲线，进行回归分析，回归方程为: A =47. 859times;103C +14. 606times;103，r 值为0. 9998，结果表明羟基红花黄色素A 在1. 02 ～ 20. 40mu;g /mL 范围内线性相关性好。 　　3. 4 精密度试验 　　分别进样对照品溶液( 102mu;g /mL) 和同一批次供试品溶液( 内蒙古库伦蒙药厂，批号:090316) ，连续6 次，进样量20mu;L，测定峰面积积分值，计算得对照品溶液及供试品溶液RSD 分别为1. 40%、1.