比较鹿衔草多糖的三种不同提取方法.docVIP

比较鹿衔草多糖的三种不同提取方法 　　鹿衔草为鹿蹄草科植物鹿蹄草(PyrolacallianthaH.Andres)或普通鹿蹄草(PyroladecorateH.Andres)的干燥全草，具有祛风湿、强筋骨、止血、止咳等功效。现代研究表明具有促进骨细胞生成、抗氧化、抗肿瘤以及对心脑血管系统的影响。经查阅相关文献，发现目前对鹿衔草的研究多集中于黄酮、鞣质、多酚等成分，而对鹿衔草多糖的研究却鲜见报道。多糖作为植物体内普遍存在的一类物质，近年来研究表明其具有增强免疫、抗氧化、降血压等方面的作用。本实验以多糖得率和多糖含量为指标，比较不同的提取方法对鹿衔草多糖提取率的影响，旨在为今后的进一步应用奠定基础。 　　1　仪器与材料 　　1.1　实验仪器与试剂 　　美谱达UV1800紫外可见分光光度计(上海美谱达公司);METTLERAE240十万分之一精密天平(瑞士);SartoriousBS224S万分之一精密天平(北京赛多利斯公司);EYELAN1100旋转蒸发仪(日本爱朗仪器有限公司);京立LDZ52离心机(北京京立离心机有限公司)。果胶酶(南宁庞博生物科技有限公司)，无水葡萄糖(天津市科密欧化学试剂开发中心);其余试剂均为分析纯。 　　1.2　实验药材 　　鹿衔草药材购于河南省郑州市东升大药房，经河南中医学院生药学教研室董诚明教授鉴定为鹿蹄草科植物鹿蹄草的干燥全草。 　　2　方法与结果 　　2.1　标准曲线的制备 　　精密称取105℃干燥至恒质量的无水葡萄糖标准品100.7mg，置100mL容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，即得质量浓度为1007mg·L-1的葡萄糖标准液，备用。分别精密吸取葡萄糖储备液1.0mL，2.0mL，3.0mL，4.0mL，5.0mL，6.0mL于100mL容量瓶中，蒸馏水定容，摇匀，得葡萄糖质量浓度分别为10.07mg·L-1、20.14mg·L-1、30.21mg·L-1、40.28mg·L-1、50.35mg·L-1、60.42mg·L-1的标准溶液。分别量取上述葡萄糖标准液与蒸馏水空白溶液1.0mL于15mL试管中，加入体积分数5%苯酚1mL和浓硫酸5mL，摇匀后室温放置40min，于490nm处测定吸光度[7]。以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线，得标准曲线方程为：y=0.0147x+0.0062(r=09993)，结果表明，葡萄糖浓度在10.07～60.42mg·L-1范围内，与吸光度线性关系良好。 　　2.2　鹿衔草多糖的提取方法 　　2.2.1　鹿衔草多糖的水提方法 　　取鹿衔草粉末若干份，加入蒸馏水提取，离心得到上清液，浓缩醇沉，沉淀分别用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤，干燥得鹿衔草粗多糖。 　　2.2.2　鹿衔草多糖的碱提方法 　　取鹿衔草粉末若干份，蒸馏水提取之后向药渣中加入氢氧化钠溶液提取，取上清液调pH到中性，浓缩醇沉，沉淀分别用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤，干燥得鹿衔草粗多糖。 　　2.2.3　鹿衔草多糖的酶提方法 　　取鹿衔草粉末若干份，加入蒸馏水50℃浸泡30min，冷却之后加入已活化的果胶酶，酶解2h，调pH至中性，90℃提取2h，离心取上清液，浓缩醇沉，沉淀分别用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤，干燥得鹿衔草粗多糖。 　　2.3　数据处理方法 　　以多糖得率及多糖含量作为衡量提取效率的双重指标，采用加权评分法综合评估鹿衔草多糖提取条件。评分标准：以各项指标除该列的最大值再乘100，为该项的得分，即可把多糖得率和多糖含量转化为0～100之间的数值。再根据多糖得率(a)和多糖含量(b)的作用，确定两者权重系数均为0.5，对这两项指标加权求和，运用公式M=0.5a+0.5b，即得综合评分(M)。多糖得率和多糖含量分数计算公式如下：多糖得率=所得多糖质量/药材质量times;100%多糖含量=Ctimes;D/Mtimes;100%(C为根据标准曲线回归方程求得质量浓度;D为稀释倍数;M为干燥后所得粗多糖的质量。 　　2.4　正交试验设计 　　采用L9(34)正交试验分别研究水提法、碱提法和酶提法的工艺。 　　2.5　正交试验结果 　　2.5.1　水提法正交试验结果 　　水提法最佳工艺方案为A3B3C3D2，即取鹿衔草粗粉，加入30倍量水，100℃回流提取3次，每次3h。极差分析表明水提法各因素的影响为Cgt;Agt;Bgt;D。 　　2.5.2　碱提法正交试验结果 　　碱提法最佳工艺方案为A2B2C1D3，即鹿衔草药渣，加入10倍量的浓度为0.08mol·L-1NaOH溶液