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活血通络汤对激素性股骨头缺血性坏死V - 0 - B反应轴及其基因表达的调控机制讨论
活血通络汤对激素性股骨头缺血性坏死V - 0 - B反应轴及其基因表达的调控机制讨论
激素性股骨头缺血性坏死( steroidinducedavascularnecrosis of femoral head,SANFH) 是临床常见疑难病,发病率逐年上升,呈年轻化趋势。该病的早中期防治是其治疗成败的关键,若错过早中期即股骨头塌陷前期的防治,该病的致残率和医疗成本将成倍增加。
现代医学多认为该病是由于大剂量长期应用激素造成股骨头活性成分( 骨组织、骨髓造血细胞和脂肪细胞) 死亡所致,缺血是其主要病变机制。现代医学对于早中期SANFH 患者,尚无阻止股骨头塌陷的特异性方法。祖国医学认为其主要病机是瘀血阻络,血行不畅或停滞,主要治法为活血化瘀,行气通络。中医认为,气为血帅,气行则血行,血行则瘀去络通; 益气则气旺,气旺则促进气行,气行则血行、瘀去络通; 故行气和益气皆可通络。但活血尤恐耗血,行气尤恐伤气; 由于肾藏精主骨生髓,精血同源,补血可充养肾精,进而促进成骨。故笔者认为该病主要治则为化瘀通络、补肾益气血,通络补肾是其关键。该方在前期临床和动物实验 ( 家兔模型的组织形态学、血液流变学和血脂变化等) 中效果良好。
鉴于此,本实验拟从分子生物学水平,通过动物实验研究通络补肾法治疗早中期SANFH 中参与骨修复与重建的血管内皮细胞生长因子( vascular endothelialgrowth factor,VEGF) 、成骨细胞( Osteoblast,OB) 和骨钙素( Bone Gla Protein,BGP) 三者之间的关系及其调控因素( 即V - O - B 反应轴及其基因表达的调控机制) ,以揭示该疗法的分子生物学作用基础及基因表达调控机制,为通络补肾法防治SANFH提供依据。
1 材料与方法
1. 1 动物来源健康日本大耳兔96 只,雌雄各半,体重2. 0 ~ 2. 5kg,由成都中医药大学动物实验中心提供。
1. 2 受试药物制备活血通络汤组成: 黄芪40g,丹参20g,地龙10g,当归30g,川芎16g,怀牛膝15g,鸡内金10g,巴戟天30g。制法: 委托四川省中医院制药车间按每次灌药量生产与分装,生药含量为1. 0g /ml。用量: 活血通络汤高、中、低3 个剂量组分别灌服活血通络汤混悬液10. 0ml /kg、5. 0ml /kg、2. 5ml /kg。
1. 3 实验方法
1. 3. 1 动物分组选取96 只日本大耳兔适应性喂养1 周,随机分为两组,正常组24 只,造模组随机分为活血通络汤高、中、低剂量组及模型组( 每组16只)。
1. 3. 2 造模方法SANFH 造模组参照贺西京等方法,家兔臀部肌注醋酸强的松龙8mg /kg,正常组臀部肌注等量的0. 9% 氯化钠注射液,均为每周2 次,连续6 周。全部动物预防性注射青霉素8 万U/kg,庆大霉素4 万U/只,2 次/周,预防感染采用间隔12小时灯照和黑暗处理,室内保持舒适恒温。每周称重1 次,观察动物精神、活动、皮毛、饮水、二便情况。
1. 3. 3 给药方法活血通络汤高、中、低3 个剂量组分别灌服活血通络汤混悬液10. 0、5. 0、2. 5ml /kg,模型组、正常组均灌服10ml /kg 蒸馏水。每日一次,连续8 周。
1. 4 实验指标检测
给药后第6、第8 周分别从每组( 活血通络汤高、中、低剂量组、模型组及正常组) 中,各随机抽取8 只兔子,检测血浆VEGF 和BGP 含量。
1. 5 统计方法
采用SPSS17. 0 行统计分析。数据以均数plusmn; 标准差( x- plusmn; s) 表示,组间采用单因素方差分析,方差齐者行LSD 检验, 方差不齐者行Tamhane#39;sT2 检验。
2 实验结果
2. 1 血浆VEGF 含量对比
2. 1. 1 不同时间点正常组与模型组对比见表1。给药第6 周: 与正常组相比,模型组家兔血浆VEGF水平明显升高,有极显著性差异( P lt; 0. 01) ; 给药第8 周: 与正常组相比,模型组家兔血浆VEGF 水平明显升高,有极显著性差异( P lt; 0. 01) 。
2. 1. 2 不同时间点模型组与治疗组比较。给药第6 周: 与模型组比较,高、中、低剂量组血浆VEGF 水平明显下降,有显著性差异( P lt; 0. 05) ;给药第8 周: 与模型组比较,高剂量组血浆VEGF 水平明显下降,有极显著性差异( P lt; 0. 01) ,中、低剂量组血浆VEGF 水平明显下降,有显著性差异( Plt; 0. 05) ; 模型组比较: 给药
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