浅析用ＨＰＬＣ法同时测定孕妇金花片中药的成分.docVIP

浅析用ＨＰＬＣ法同时测定孕妇金花片中药的成分 　　孕妇金花片由栀子、白芍、金银花等9味中药材提取精制而成，具有清热、安胎的功效。临床主要用于孕妇头痛、晕眩、口鼻生疮、咽喉肿痛等。栀子苷是栀子的主要成分之一，具有泻火除烦、清热利尿、凉血解毒等功效。白芍的主要成分为芍药苷，临床上白芍组方常用于治疗多种腹痛以及肋痛、痛经、肢体痉挛痛、头痛等，具有直接镇痛作用。笔者采用反相高效液相色谱法，研究孕妇金花片中栀子苷和芍药苷的含量测定方法，为孕妇金花片的质量控制和评价提供参考依据。 　　1　仪器与试剂 　　Dionex-P680高效液相色谱仪;上海科导超声仪器有限公司5200H 型超声波清洗器;AT-201电子分析天(d=0.01mg，瑞士);孕妇金花片(自制);栀子苷对照品，供含量测定用，中国药品生物检定所，批号：110749-200309;芍药苷对照品，供含量测定用，中国药品生物检定所，批号：0736-9508;乙腈为色谱纯;水为重蒸馏水(自制);甲酸等其他试剂均为分析纯。 　　2　方法与结果 　　2.1　溶液的配制溶液的配制参照文献进行。①对照品溶液：取经五氧化二磷减压干燥器中干燥36h的栀子苷对照品和芍药苷对照品适量，分别精密称定，加甲醇制成每1mL含栀子苷90mu;g、芍药苷50mu;g的溶液。②供试品溶液：取孕妇金花片10片，研匀，取约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加甲醇50mL，密塞，轻轻振摇，称定重量，超声处理50min，放冷，称定重量，用甲醇补足减失的重量，振摇，用0.45mu;m微孔滤膜滤过，取续滤液即得。③阴性对照溶液：按孕妇金花片处方比例和工艺，制备不含白芍和栀子的阴性样品。按供试品溶液制备方法制得阴性对照溶液。 　　2.2　色谱条件色谱柱：Aglient　XDB-C18柱(4.6mmtimes;250mm，5mu;m);流动相：乙腈-0.1%甲酸(12.5∶87.5);流速：1.0mL/min;柱温：30℃;检测波长：236nm。 　　2.3　系统适用性试验按照上述色谱条件，取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各10mu;L进样，记录色谱图。理论塔板数按栀子苷峰计算不低于11000，按芍药苷峰计算不低于7000，分离度均大于1.5，峰形对称，阴性无干扰。 　　2.4　标准曲线的制备取两种对照品适量，分别精密称定，加甲醇制成浓度为180mu;g/mL的栀子苷和100mu;g/mL的芍药苷的混合对照品溶液，精密量取上述对照品溶液1、2、4、6、8、10mL分别置于10mL量瓶中，加甲醇定容，摇匀。分别精密量取上述对照品溶液10mu;L，各进样2次，按上述色谱条件测定。以峰面积平均值为纵坐标(Y)，以进样量为横坐标(X)绘制标准曲线。结果表明，栀子苷在0.18～1.8mu;g范围内线性关系良好，回归方程为Y=12.982　X-0.0634，r=0.9999;芍药苷在0.10～1.0mu;g范围内线性关系良好，回归方程为Y=23.088　X-0.0472，r=0.9999。 　　2.5　精密度试验精密吸取同一对照品溶液，连续进样6次，测定，结果栀子苷的峰面积RSD为0.6%，芍药苷的峰面积RSD为0.9%。 　　2.6　稳定性试验取同一供试品溶液，按上述色谱条件，分别于0、2、4、8、12、24h测定峰面积。结果栀子苷的峰面积RSD为1.2%，芍药苷的峰面积RSD为0.7%，试验结果表明，供试品溶液在24h内稳定性良好。 　　2.7　重复性试验按照含量测定的方法，对同一样品(批号：131201)测定6次，结果栀子苷和芍药苷含量平均值分别为4.3436、2.4047mg/g，RSD分别为1.8%、1.3%。 　　2.8　加样回收试验取已知含量的孕妇金花片样品(批号：131201)细粉6份，每份约0.4g，精密称定，置具塞锥形瓶中，分别精密加入对照品溶液20mL，精密加甲醇30mL，按2.1.2项供试品溶液制备方法制备，分别按上述色谱条件测定。结果(见表1、2)表明本法回收率为分别为99.88%、99.39%，RSD分别为1.5%、1.3%。 　　2.9　含量测定按照上述含量测定方法，测定三批孕妇金花片的含量，采用外标法计算含量。 G 　　3　结论 　　中药及其制剂很多以栀子苷或芍药苷为含量测定指标，流动相多采用甲醇-水、乙腈-水、乙腈-磷酸等系统。笔者采用反相高效液相色谱法，同时测定孕妇金花片中栀子苷和芍药苷的含量，对测定波长和流动相等条件进行了实验考察，结果流动相为乙腈-0.1%甲酸(12.5∶87.5)，可使栀子苷和芍药苷与杂质峰分离情况最佳;检测波长为236nm，栀子苷和芍药苷的检测灵敏度均