浅谈GC-MS检测人心血及肝脏中的巴比妥.docVIP

浅谈GC-MS检测人心血及肝脏中的巴比妥 　　巴比妥(Barbital)，分子式C8H12N2O3，分子量为184.19，属于环丙二酰脲类药物，显酸性，是常见的催眠镇静药，有抑制中枢神经的作用。随着巴比妥在临床上的广泛使用，越来越多案(事)件是由此引起的，这就是建立可靠、快速、简单，满足对生物检材中的巴比妥进行检验的方法具有较好的现实意义。本文基于巴比妥的理化性质及参考文献的基础上，提出生物检材经过简单的萃取后，用GC-MS对样品进行检测的方法。 　　1材料与方法 　　1.1主要仪器和试剂 　　GC/MS：Agilent7890A/5975C气相色谱-质谱联用仪;配有电子轰击离子源(EI)及Nest11.0化学图谱库、95%乙醇(分析纯)、乙酸乙酯(分析纯)、甲醇(色谱纯)。 　　1.2检材 　　待测样品：邹某某心血，邹某某肝脏。 　　1.3实验方法 　　1.3.1GC/MS仪器条件 　　离子源：EI源，离子化能量：70eV，离子源温度：230℃;四极杆温度：150℃;色谱柱：HP-5ms30mtimes;0.25mmtimes;0.25mu;m。进样口温度：280℃;传输线温度：250℃;程序升温：初温80℃保持3min，以30℃/min的速率升温到300℃，保持8min;进样方式：分流进样，分流比：10:1;载气：氦气，纯度：gt;99.99%，流速：1.0ml/min。 　　1.3.2样品前处理 　　取邹某某心血5mL，邹某某肝脏10g(剪碎)，分别置于50mL具塞塑料离心管中，均加入LpH=3～4的95%乙醇15m浸泡30min，然后置于3000r/min离心机离心3min，取出上清液分别放置于两个蒸发皿中，残渣仍然用pH=3～4的95%乙醇30mL浸提二次，并把后二次的上清液合并于同一个蒸发皿中，90℃水浴锅上蒸发皿挥干，取下，冷却一直至室温。 　　用=3～5的盐酸水溶液10mLpH少量多次的洗涤蒸发皿上的挥干物，并转移至50mL具塞塑料离心管，用乙酸乙酯25mL萃取二次，二次萃取液都置于同一蒸发皿中，把蒸发皿放在90℃水浴锅上挥干，取下蒸发皿，冷却至室温。 　　多次地洗涤蒸发皿中的萃取物质用少量1mL色谱纯甲醇，放进样瓶中，邹某某待测心血便可以得到，以及待测肝脏。 　　1.3.3分析检测 　　邹某某的待测心血，邹某某的待测肝脏，空白对照样品(色谱纯甲醇)分别进样1mu;L，进行分离分析，用GC/MS在1.3.1条件下。 　　2结果 　　2.1心血的检测结果 　　经检验色谱纯甲醇空白对照样品TIC图中6.433min处未出峰，说明色谱纯甲醇可以作为空白试剂使用。图1为邹某某待测心血的TIC图，TIC图中6.433min出现巴比妥的色谱峰，图2为邹某某待测心血TIC图中巴比妥色谱峰所对应的MS图，MS图中显示巴比妥的特征离子碎片为：141及156，检测结果可得出，邹某某待测心血中检出巴比妥的结论。 　　2.2肝脏的检测结果 　　图3为邹某某待测肝脏的TIC图，TIC图中6.481min出现巴比妥的色谱峰，图4为邹某某待测肝脏TIC图中巴比妥色谱峰所对应的MS图，MS图中显示巴比妥的特征离子碎片为：141及156，检测结果可得出，邹某某待测肝脏中检出巴比妥的结论。 　　3讨论 　　TIC图均显示分离效果好，背景干扰小，虽然心血及肝脏中定性的保留时间存在一定的差异，但是误差lt;1%，定性的准确性是不影响的，巴比妥的特征离子碎片再MS图中显示，及巴比妥的分子结构，与Nest11.0化学图谱库中巴比妥的匹配度gt;95%，这些都充分证明了定性的可靠性及所建方法的可行性。 　　经案情调查，邹某某(男，15岁)，在校期间被人打殴损伤，诊断为颅骨骨折，颅内出血，2016年某日上午突然死亡;据了解邹某某在住院期间确实用过巴比妥药物，本文在邹某某的心血及肝脏中均检出巴比妥，与案情相符，这也说明方法真实、可靠，可用人心血及肝脏中巴比妥的检测。 ghrW 　　4结论 　　本文根据巴比妥显酸性的性质，采用95%酸性乙醇沉淀蛋白后，在酸性条件下进行检材前处理，用GC-MS检测人心血及肝脏中的巴比妥;所建方法简便、快速、可靠，巴比妥用于定性的保留时间为6.530min，特征离子碎片为：141及156。