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浅谈HPLC 法测定接骨丸中马钱子碱含量 　　接骨丸至是由甜瓜子、土鳖虫、地龙、炒桂枝、郁金等八味中药经粉碎一定细度，和一定比例的马钱子粉混合过筛，水泛丸所得。它在临床上主要用于外界暴力所致的跌打损伤，伤筋动骨等外科疾病，应用于临床多年，疗效确切，作为治疗伤筋动骨的要药，在市场上占有巨大份额。马钱子在方中作为臣药，主要辅助君药加强治疗。但是马钱子作为剧毒药物，其所含的士的宁和马钱子碱有兴奋中枢神经的作用，使用过量容易导致惊厥、抽搐和昏迷等严重神经系统不良反应。为了控制药品的质量，本文采用高效液相色谱( HPLC) 法对接骨丸中马钱子碱含量进行测定，进而控制该药品的安全范围，该方法操作简单，结果准确且重现性较好。 　　1 仪器与试药 　　1. 1 样品来源接骨丸( 河北万岁药业有限公司，批号:131201) ，粉碎至一定细度，备用。 　　1. 2 仪器和试药HP - 1100 高效液相色谱仪( 美国，型号HP - 1100) ; 色谱柱，Agilent C18( 250 mm times; 4. 6 mm，5 mu;m)柱; 超声波清洗器( 北京医疗设备二厂，型号kh - 3200DB) ;十万分之一电子天平( AE240) ; 甲醇和乙腈试液为色谱纯;双蒸水自制; 正己烷、二氯甲烷、浓氨均为分析纯。马钱子碱对照品( 中国药品生物制品鉴定所，批号110753 - 200212) ，士的宁对照品( 中国药品生物制品制定所，批号: 110752 -201212) 。 　　2 方法与结果 　　2. 1 色谱条件及系统适用性试验色谱柱为Agilent C18( 250. 0 mm times; 4. 6 mm，5 mu;m) 柱; 流动相: 乙腈∶0. 2%醋酸水溶液( 25∶75) ，等度洗脱，检测波长设定为260 nm; 柱温为30 ℃; 流速为1 mL·min - 1 ; 理论板数按马钱子碱的峰计算应不低于5 000。 　　2. 2 对照品溶液的制备精密称取士的宁、马钱子碱对照品适量，加乙酸乙酯制成每1 L 含0. 4 g 的溶液，即得。 　　2. 3 供试品溶液制备取三份本品粉末分别0. 5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加氯仿25 mL 与浓氨试液1 mL，密塞，轻轻振摇，称定重量，放置24 h，再称定重量，用氯仿补足减失的重量，充分振摇，滤过，精密量取滤液10 mL，置分液漏斗中，用硫酸溶液( 3 mLrarr;100 mL) 提取5 次，每次15 mL，合并硫酸液，加浓氨试液调节pH 值至9 ～ 10，用氯仿提取5 次，每次20 mL，合并氯仿液，蒸干，残渣加乙酸乙酯溶解，转移至10 mL 量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，即得。 　　2. 4 阴性供试品溶液的制备按照处方的配比情况，除去马钱子，其他饮片按照接骨丸的制备方法制成丸剂，根据供试品的制备方法制备阴性供试品溶液，备用。 　　2. 5 方法学考察 　　2. 5. 1 线性关系考察精密吸取“2. 2”项下混合对照品溶液2 mu;L、4 mu;L、6 mu;L、8 mu;L、10 mu;L 注入高效液相色谱仪，按上述色谱条件测定峰面积; 纵坐标为峰面积，横坐标为进样量，绘制标准曲线，得回归方程为马钱子碱Y = 0. 302 4X -0. 402 3( r = 0. 999 95) ; 计算结果表明马钱子碱在0. 080 ～0. 400 mu;g 范围内呈现良好的线性关系。 　　2. 5. 2 精密度试验精密吸取同一供试品溶液4 mu;L，连续进样6 次，记录峰面积，马钱子碱的RSD 值0. 318%，结果表明仪器有良好的精密度。 　　2. 5. 3 稳定性试验精密吸取同一个供试品溶液分别在0 h、2 h、4 h、6 h、8 h 重复进样一次，每次进样4 mu;L，测定8h，记录下马钱子碱的峰面积，RSD 值为1. 36%，说明了马钱子碱在8 h 内稳定性较好。 　　2. 5. 4 重复性试验精密称定6 份同一批供试品适量，按照制备供试品溶液的方法制备，平行测定，每次进样4 mu;L，记录马钱子碱的峰面积，结果RSD 值2. 83%，表明该方法的重复性良好。 　　2. 5. 5 加样回收率试验称定已知含量的接骨丸( 批号 样品5 份，每份约0. 5 g，精密称定，精密加入一定质量的马钱子碱对照溶液，按照上述测定含量的方法测定。每次进样4 mu;L，结果马钱子碱的加样回收率为98. 57%，RSD值为1. 64% 　　2. 5. 6 专属性试验精密吸取阴性供试品溶液4 mu;L，注入高效液相色谱仪中进行测定，阴性供试品在马钱子碱