免疫学检测与抗体技术.pptVIP

3.小分子抗体 (1)ScFv：由VH和VL中间连以14?15个小肽,常用的连接肽为(Gly4Ser)3 (2)VH与VL适当部位各引入一个半胱氨酸形成以二硫键固定的Fv段而构成的DsFv (3)将ScFv中两个可变区之间的接头缩短,使两分子间VH和VL配对形成双价小分子抗体(Diabody) (4)将两种不同特异性的V基因交叉配对,则可得到双特异性Diabody (5)在ScFv的一端加上一个双聚化结构亦可构建不同类型的双价或双特异性小分子抗体,如Minibody等 (二)抗体库技术 (三)产生嵌合抗体的小鼠和产生人抗体的小鼠 利用基因打靶和取代的方法以及转基因技术产生嵌合抗体。 通过转基因、基因缺失及杂交和选择等一系列过程，获得双转染基因(人H、?链基因)的纯合小鼠。其脾、淋巴结、骨髓中的B细胞可表达人的??链。 (四)细胞内抗体 *细胞内抗体是指在细胞内合成并作用于细胞内组分的抗体,亦称为内抗体(intrabody)。 *若在抗体基因的N端或C端加入引导序列就能使抗体表达定位亚细胞部位,如胞浆、线粒体、内质网或细胞核部位。 *若在细胞内表达特异识别与肿瘤发生有关的癌基因编码的抗体,即可抑制癌基因编码产物的表达,可用于肿瘤的治疗。 *细胞内免疫用于病毒性疾病的治疗 *抗EGFR胞外区的ScFv-R IR,并在ScFv-R IR的C-末端连接KDEL肽,提供ER滞留 (五)基因工程抗体衍生技术 1．双特异性抗体(BsAb)或称双功能抗体(BfA)。 2. 抗体的抗原化技术：借助人源化抗体的构建方法，以抗体V区作为分子载体来表达生物学相关的多肽或外源性抗原表位，即抗原化抗体(antigenized antibody,AbAg)。 3．抗体重组免疫毒素 4.催化抗体(catalytic antibody)或抗体酶(abzyme)：将催化活性引入抗体的结合部位,产生一种具有抗体和酶双功能的蛋白质,称为抗体酶或程序性酶(programmable enzyme)。 十、杂交瘤技术与T细胞克隆技术 一、杂交瘤技术 1. B细胞杂交瘤技术与单抗的制备 2. T细胞杂交瘤技术与其功能的研究 二、 T细胞克隆技术 *按其特异性分为抗原特异性和非特异性T细胞克隆。 *按其功能则可分为辅助性和细胞毒性T细胞克隆。 (一)抗原特异性T细胞克隆 (二)抗原非特异性T细胞克隆的制备 (三)同种反应性TH和CTL克隆的制备 (四)肿瘤抗原特异性CTL克隆 细胞凋亡的检测 一、概述 细胞凋亡(apoptosis,Apo)是生物体内无用的、老化的一些损伤细胞自动死亡的一种形式，是指在一定的生理和病理情况下,机体为维护内环境的稳定,通过基因调控而使细胞自动消亡的过程。 二、细胞凋亡与细胞坏死的区别 *细胞坏死是细胞膜,线粒体膜结构、流动性、渗透性及受体等均受损, 进而细胞溶解、坏死；而细胞凋亡时上述结构和功能均保持不变； *细胞坏死时,ATP和蛋白质合成抑制及终止;细胞凋亡时,ATP、mRNA和蛋白质合成依旧,细胞第二信号系统仍活动; *细胞坏死时,细胞DNA随机降解,电泳不呈梯状图谱;细胞凋亡时,DNA多降解成180～200bp或其倍数的梯状片段,电泳呈梯状图谱; *细胞坏死时,细胞内容物外溢,引起局部炎症反应或组织损伤;细胞凋亡时,细胞内容物不外溢, 所以不引起炎症反应或局部损伤; *细胞坏死时,往往是成团细胞死亡;细胞凋亡时,在组织中呈分散状态分布。 三、研究细胞凋亡的意义 1. 细胞凋亡在肿瘤形成和治疗中具有重要作用。 *凋亡基因与抗凋亡基因突变 →→易形成肿瘤； *免疫效应细胞表达FasL, 肿瘤细胞表达Fas→→诱导肿瘤细胞凋亡 →→抗肿瘤 *肿瘤细胞高表达FasL→→诱导免疫细胞凋亡 →→抑制免疫功能→→逃避免疫监视 *肿瘤细胞低表达或不表达Fas →→逃避免疫监视 2. 细胞凋亡与免疫学的关系 *细胞凋亡与T细胞在胸腺的发育 *细胞凋亡与成熟T细胞：AICD *细胞凋亡与与B细胞 *细胞凋亡与胞毒效应 3.细胞凋亡参与自身免疫病的发生 4.细胞凋亡与病毒感染 *抗病毒免疫防御 *细胞凋亡与AIDS *细胞凋亡与病毒性肝炎 细胞凋亡的检测方法 一、形态学方法 1．普通光学显微镜检测法 2．荧光显微镜检测法 材料：①石蜡切片;②冰冻切片;③细胞学涂片。