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第五章 病原菌的检验 主要的食物导致的疾病 大肠埃希菌是肠杆菌科细菌中，从各种温血动物的肠道中检出率最高的菌种。 最早是由埃希（ Escherich）1895年在粪便中发现而命名，又称大肠杆菌（coli），在鱼类、两栖类、昆虫的肠道中也存在。 从新生儿开始就终生存在，与人体是共栖关系，人体供给它生长条件，而这类菌的代谢产物能抑制肠道内其它分解蛋白质的细菌的生长，减少蛋白质分解产物对人体的危害，并能合成VB,VK,供人体吸收利用。 是一种条件致病菌。当机体免疫力降低时，或侵入肠外组织，可引起肠道外感染，如肾炎、胆囊炎、胆结石、膀胱炎、肺炎、败血症等。 有些菌株致病性强，能直接导致肠道感染。 药品、食品中有无大肠埃希菌及数量多少，可判断药品、食品是否被粪便污染及污染的程度。如果检出该菌，表明被粪便污染，且有可能污染伤寒、痢疾或其他肠道致病菌 一、大肠埃希菌的生物学特性 1.形态与染色 是两端钝圆的革兰氏阴性短小杆菌，有时近球形 （1.1-1.5）μm ×(2.0-6.0)μm 无芽孢，以周身边毛运动或不运动，某些菌株具有荚膜。 2.培养特性 最适温度37 ℃ ，可在15-46 ℃生长. 最适pH7.4-7.6。 需氧或兼性厌氧。 在EMB平板上，典型菌落呈紫黑色，有金属光泽； 在药品中分离到的菌株也有菌落呈粉色，无金属光泽，中心紫色，扁平，低度突起，光滑湿润。 致病菌的菌落无色，透明或半透明。但由于药物的影响，有可能改变，应挑取多种菌落进行鉴定。 3.生化特性 能迅速分解葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇等多种糖类，产酸产气。产生的丙酮酸可分解为乳酸、乙酸、甲酸。甲酸又被分解为二氧化碳和氢气。 不分解尿素 IMViC 反应++-- 4.抗原结构 菌体抗原（O抗原）：是细胞壁成分。耐热、121 ℃不破坏，有171种血清型。 表面抗原（K抗原）：是存在于荚膜、被膜体表部分的抗原。不能被O血清所凝集，具有O不凝集性。 鞭毛抗原（H抗原）：由不耐热的蛋白质组成，60 ℃被破坏。共有56个血清型。 抗原式为：O111K58H12 5.抵抗力 对热的抵抗力较强 在自然界中可存活数周至数月 对磺胺类、四环类等抗生素敏感 对煌绿染料比沙门氏菌敏感 耐胆盐 对漂白粉、酚、醛等敏感 6.致病力 侵袭力:K抗原、菌毛 内毒素：类脂A 肠毒素：肠产毒型大肠杆菌类似于霍乱弧菌。产生两类肠毒素。均在质粒中编码。 致病性大肠埃希菌主要分为五类： 大肠杆菌O157 1982年在美国的一次汉堡包食物中毒事件中首次被发现。 96年在日本流行。 寄生在牛、羊等动物的肠道内以及土壤和污水中，中毒者往往都伴有剧烈的腹痛、高烧和血痢，病情严重者会危及生命。 美国威斯康星大学绘制出其完整基因组图谱。发现了1387个特有的新基因。 具有一些被称为“DNA岛”的特殊片断，像岛屿一样分散在整个基因组中。其中一些“DNA岛”里包含有与致病过程有关的基因，能够控制产生毒素，或帮助O157更牢固地附着在肠胃中。 大肠杆菌O26 英2年死83人, 可导致血液感染及尿道感染，年纪较大或患有其他严重疾病的感染人士很可能出现其他并发症。 导致血液感染的大肠杆菌个案，在过去10年来已上升1倍； 抗药性的个案从2001年的2%上升至2004年的6%。 二、大肠埃希菌检查法 IMViC 靛基质试验(indol test)： 取培养物接种于胨水培养基，培养24-48h，沿管壁加入柯凡克试剂数滴，液面呈玫瑰红色为阳性. 原理： 含有色氨酸酶的细菌能分解蛋白胨中的色氨酸，形成吲哚。吲哚无色，加入对二甲氨基苯甲醛后，形成红紫色醌式化合物，即玫瑰吲哚。 甲基红试验(methyl red test)：取培养物接种于磷酸盐葡萄糖胨水培养基，培养48h，沿管壁加入甲基红试剂5-6滴，液面呈鲜红色或橘红色为阳性。 原理：细菌发酵葡萄糖，在磷酸盐葡萄糖胨水培养基中，发酵产酸，使甲基红试剂变色而呈阳性反应。有的细菌可使pH下降至于4.5或更低；有的则使发酵产物脱羧而产生中性乙酰甲基甲醇，使pH回升至5.4以上。 乙酰甲基甲醇生成试验 (Voges-Prokauer test)：取培养物接种于磷酸盐葡萄糖胨水培养基，培养48h，沿管壁加入a萘酚乙醇试剂1mL，混匀，再加40%氢氧化钾试液0.4mL，摇匀，4h内出现红色为阳性。 原理：细菌发酵葡萄糖生成丙酮酸，再脱羧生成乙酰甲基甲醇。在碱性溶液中氧化生成二乙酰（丁二酮）。再与蛋白胨中精氨酸的胍基作用生成红色化合物。一般情况下，与甲基红反应呈相反结果。 柠檬酸盐利用试验(citrate test)：取培养物接种于柠檬酸盐培养基，培养2-4天，斜面有菌苔生长，培养基由绿色变为蓝色时为阳性。 原理：柠檬酸盐利用培养基是合成培养基，不含蛋白胨和糖类，以柠