复件微生物检测-第五章3幻灯片.pptVIP

第三节 金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)检查法 一、生物学性状 金黄色葡萄球菌能产生多种毒素及酶，这些毒性物质是它致病力强的物质基础，能引起局部及全身化脓性炎症，严重时可发展成为败血症及脓毒血症，是人类化脓性感染中最重要的病原菌。 球形，大小不一，直径为0.4-1.2μm，平均为0.8μm。 无鞭毛，无芽孢。不形成荚膜。 在固体基质上，常堆聚成葡萄串状。 在液体培养基中，呈双、呈链状排列。 革兰染色阳性；当衰老、死亡或被中性粒细胞吞噬后常转为阴性。 （二）培养特征 菌落0.8-1.5mm，圆形不透明、边缘整齐、光滑 最适温度37℃，最适pH7.4。需氧或兼性厌氧，在20%-30% CO2环境中有利毒素产生。 耐盐，在10%-15%的氯化钠培养基中能生长。 在营养琼脂平板上产生金黄色脂溶性色素。 在血琼脂平板上，菌落较大，且产生全透明溶血环。 在卵黄高盐琼脂平板上分解卵磷脂在菌落周围形成白色乳浊圈。 （三）生化反应 糖发酵产酸不产气 甲基红阳性，v-P阳性，吲哚阴性 尿素酶阳性，还原硝酸盐，液化明胶 产血浆凝固酶，耐热DNA酶和精氨酸双解酶，有时产生磷酸酶和触酶 （四）抗原构造 1.蛋白质抗原（staphylococcal protein A，SPA）： 有种属特异性，存在于细胞表面，是细胞壁的主要成分，能和人和动物血清中的IgG结合，具有抗吞噬作用，能促使细胞分裂。90%以上菌株具有此抗原。 2.多糖抗原：是半抗原，具有型特异性。分为： （1）甲型多糖抗原：从S. aureus 中提出，磷壁酸中的N-乙酰葡萄糖胺核酸醇残基 （2）乙型多糖抗原：非致病葡萄球菌中提出，磷壁酸中的N-乙酰葡萄糖胺甘油残基 （3）丙型多糖抗原：由多型葡萄球菌中提出 （五）抵抗力 抗干燥 在60-70℃1h才能被杀死，80℃30min能存活 在5%苯酚或0.1%升汞溶液10-15min才杀死 耐高盐 对红霉素、链霉素、庆大霉素、先锋霉素敏感 90%以上菌株对青霉素有耐药性 （六）致病性 侵袭力invasiveness ： 溶血毒素（hemolysin, staphylolysin）:是一种外毒素，不耐热。有αβγδ四种。 α溶血毒素：对人类有致病作用的是α溶血毒素，对红细胞有溶血作用，能损伤血小板和血管平滑肌。 β溶血毒素：在培养基上产生，具溶血活性。 γ、δ溶血毒素：抗原性有差异 杀白细胞素（leucocidin）：能杀死动物白细胞，具有抗原性。 肠毒素（enterotoxin）：引起急性胃肠炎，对热稳定，有A、B、C、D、E五型。A型引起的食物中毒最多。 剥脱性毒素（exfoliative toxin）：可引起人和鼠表皮剥脱性病变。 凝固酶（coagulase）：一般致病性葡萄球菌产生此凝固酶，可分为两种： 结合凝固酶（bound coagulase）：直接作用于血浆中纤维蛋白原，使之变成纤维蛋白，凝集成块。 游离型凝固酶（free coagulase）：不直接作用于血浆中纤维蛋白原，而是和一种凝固酶反应因子结合，形成一种稳定复合物，作用于纤维蛋白原，使血浆凝固。 其他物质：产透明质酸酶，皮肤坏死毒素、耐热DNA酶和精氨酸双解酶，有时产生磷酸酶和触酶、红疮毒素、溶纤维蛋白酶等。 二、常规检查法 增菌培养：取1：10的检样稀释液，放至营养肉汤中培养18-24h。 分离培养：将增菌液用接种环沾取1-2环，划线接种于卵黄高盐琼脂平板或甘露醇高盐平板、血琼脂平板上。36℃培养24-72h。 卵黄高盐琼脂：金黄色，菌落1-2mm，圆形凸起、边缘整齐、光滑湿润、外周有乳浊圈。 甘露醇高盐平板：金黄色，菌落0.7-1mm，圆形凸起、边缘整齐、光滑湿润、外周有黄色环。 血琼脂平板上：金黄色，菌落2-4mm，圆形凸起、边缘整齐、光滑湿润、外周有透明溶血环。 菌落圆形,表面光滑、凸起、湿润,直径2～3mm。 灰黑色至黑色,有光泽,常有浅色(非白色)的边缘,周围绕以不透明圈 (沉淀),其外常有一清晰带。 当用接种针触及菌落时具有黄油样粘稠感。有时见到不分解脂肪的菌株,除没有不透明圈和清晰带外,其他外观基本相同。 从长期贮存的冷冻或脱水食品中分离的菌落,其黑色常较典型菌落浅些,且外观可能较粗糙,质地较干燥。 在传统的Baird Parker基础中加入(兔血浆+纤维蛋白原试验)。培养后，在菌落周围出现大而清晰的“光晕“即可证实该葡萄球凝固酶为阳性。 在24小时的培养过程中，同时进行了选择性的分离培养和凝固酶试验。与传统的“Baird Parker琼脂+蛋黄”观察脂酶活性相比，凝固酶的产生是一个更加特异的鉴定葡萄球菌的试验。 纯培养：挑取上述菌落2-3个，接种于营养肉汤琼脂斜面上，36℃培养18-24h，取培养物进行