石蜡包埋切片方法总汇.doc

石蜡切片基本步骤之一器材和试剂一、准备工作（一）（一）洗涤实验所需器皿：（玻璃器皿的清洗）?1、用洗衣粉将玻璃器皿表里擦洗干净反复洗刷?2、将器皿在自来水下冲洗干净?3、将器皿倒扣在铺有吸水纸或纱布的桌子上控干?注：一般情况下，经以上步骤后，用蒸馏水洗过1~3次即可烘干备用，如果做特殊染色还需浸泡在酸性清洁液内12~24小时，再经自来水彻底冲洗，再用蒸馏水过洗1~3次烘干备用。?（二）配制：硫酸洗液的配制?（三）载玻片与盖玻片的处理?1.?将所需载玻片与盖玻片清洗后，放入硫酸重铬酸钾溶液中浸泡24小时?2.?流水冲洗，再用蒸馏水冲洗3遍?3. 95%~100%酒精浸泡24小时，用绸布擦干备用?注：在将载玻片与盖玻片放入清洁液中时，要一片片地投入，使其不致重叠。二、准备工作（二）常用液体的配制?（一）缓冲溶液：?1．磷酸盐缓冲液?A液：0.1mol/L磷酸二氢钠?B液：0.1mol/L磷酸氢二钠?A液与B液按比例混合调整到所需的PH值（3：7asympH7.0）?2．枸椽酸缓冲溶液?A液：0.1mol/L枸椽酸?B液：0.1mol/L枸椽酸钠?A液与B液按比例混合调整到所需的PH值（6.2：42.8asympH6.2）?（二）固定剂：?1．甲醛：10%甲醛福尔马林?100ml;?蒸馏水?900ml?注：实际甲醛含量只有3.6~4.0%但习惯上都将其视为10%。?2．10％中性福尔马林钙固定液?甲醛液?10ml?;蒸馏水?90ml?加碳酸钙至过饱和(以容器底部碳酸钙沉淀1~50px厚为适度)充分振荡混合后，放置24小时取上清液使用。?3．4%多聚甲醛：?8%多聚甲醛:?多聚甲醛?8g;蒸馏水?100ml?加温至60℃左右，不时搅拌，成为乳白色溶液。滴加1N NaOH，并不停搅动至液体清明。?1N NaOH?lN等于1L溶液中某种物质1mol除以该物质的氢当量价所得数值的量?氧化钠(NaOH )；分子量＝40．005，当量价＝1?1N Na0H的配制方法为：m＝40．005／1＝40．005g。取40．005gNaOH溶解于1L蒸馏水中4%多聚甲醛?;8%多聚甲醛?50ml?0.1M磷酸盐缓冲液?50ml?PH7.2?组织石蜡切片制作.pdf 先取50 ml 8%多聚甲醛，用0.1M磷酸二氢钠和0.1M磷酸氢二钠将PH值调至7.24．Bouin液：?苦味酸饱和水溶液?75ml?36％~40％福尔马林液?25ml?冰醋酸?5m1?5．改良Bouin氏固定液苦味酸饱和水溶液?45ml?95%酒精?45ml?36％~40％福尔马林液?5ml?冰醋酸?5m1 （三）染色液?1．Harris苏木精液?A液：?苏木精?1g?无水酒精?10ml?B液：?铵矾或钾矾?20g?蒸馏水?200ml?氧化汞?0.5ml?冰醋酸?8ml?将矾溶于水，加热溶解（B液），稍冷后将苏木精酒精液（A液）混入B液，加热，稍冷却，加氧化汞，再继续加热1分钟，染液变为紫色，注意在加氧化汞时宜逐渐少量加入，防止染液溅出。全冷后呈深紫色，将烧杯口用纱布盖好，隔夜过滤，在过滤液内每96 ml中加4 ml冰醋酸，放置1周后成熟，即可用于染色，保存期1~2个月。此染液在加醋酸后，对核染色特具选择性，故很适于脱落细胞的核染色。由于染液内已加有氧化剂，故不能长期储存，但利于配后即用。?2．Mayer苏木精掖?苏木精?1g?钾矾或铵矾?50g?碘酸钠?0.2g?蒸馏水?1000ml?水合氯醛?50g?枸橼酸?1g?将苏木精，钾矾及碘酸钠依次加入水内，略加热并搅拌，此时液体呈蓝色，待全溶后过夜。再加入水合氯醛及枸橼酸并加热至煮沸5分钟，冷后过滤备用。如不急用可不煮沸而在室温待其成熟，染液可较长期贮存使用。核染色鲜明，染色时间5—10分钟。用该染液染色后，不需分化，充分水洗蓝化后即可，伊红复染细胞质，使用一段时间后就要换新溶液。?3．Hasnsen甲矾苏木精的配制?A液：苏木精?1g?无水乙醇?10ml?B液：钾矾?20g?蒸馏水?200ml?C液：高锰酸钾?1g?蒸馏水?16ml?三液分别溶化后，将A液倒入B液，再加入C液3ml，充分搅拌均匀后加热至沸腾，1分钟左右，将容器置于冷水中使其迅速冷却，此液配后即可使用，染后无需碱化，细胞核即为蓝色，效果较好，高锰酸钾可以迅速氧化苏木精（每1g苏木精需0.177g高锰酸钾氧化）。?4．伊红?0.5~1%水溶液或酒精溶液。?1．水溶性伊红?伊红?5~10g?蒸馏水?1000ml?冰醋酸?10滴?先将水溶性伊红加入蒸馏水中，用玻璃棒搅起泡沫后过滤，再加冰醋酸。?2．醇溶性伊红?伊红?