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微生物限度检查法 录入时间:2006-7-6 15:25:25 来源：其它 ??????微生物限度检查法系指非规定灭菌制剂及其原、辅料受到微生物污染程度的一种检查方法，包括染菌量及控制菌的检查。供试品应随机抽样。一般抽样量为检验用量（2个以上最小包装单位）的3倍量。检查的全过程,均应严格遵守无菌操作，严防再污染。除另有规定外，本检查法中细菌培养温度为30～35℃，霉菌、酵母菌培养温度为25～28℃，控制菌培养温度为36℃±1℃。检验结果的报告以1g、1ml或10cm2为单位。培养基及其制备方法除另有规定外，培养基制备的灭菌条件为121℃20分钟。1.营养琼脂培养基与营养肉汤培养基?见无菌检查法（附录Ⅺ?H）。2.玫瑰红钠琼脂培养基胨?5g?玫瑰红钠?0.0133g?葡萄糖?10g?琼脂?15～20g?磷酸二氢钾?1g?水?1000ml硫酸镁?0.5g?除葡萄糖、玫瑰红钠外，取上述成分，混合，加热溶化后，滤过，加入葡萄糖、玫瑰红钠，分装，灭菌。3.酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基(YPD)胨?10g?琼脂?15～20g?酵母浸出粉?5g?水?1000ml?葡萄糖?20g除葡萄糖外，取上述成分，混合，加热溶化后，滤过，加入葡萄糖，分装，灭菌。4.胆盐乳糖培养基(BL)胨?20g?磷酸二氢钾?1.3g?乳糖?5g?牛胆盐（或去氧胆酸钠0.5g）2g氯化钠?5g?水?1000ml磷酸氢二钾?4.0g除乳糖、牛胆盐外，取上述成分，混合，加热使溶解，调节pH值使灭菌后为7.4±0.2，煮沸，滤清，加入乳糖、牛胆盐，分装，灭菌。5.曙红亚甲蓝琼脂培养基(EMB)营养琼脂培养基?100ml?曙红钠指示液?2ml20％乳糖溶液?5ml?亚甲蓝指示液?1.3～1.6ml取营养琼脂培养基，加热溶化后，冷至60℃，按无菌操作加入灭菌的其他3种溶液，摇匀，倾注平皿。6.麦康凯琼脂培养基(MacC)胨?20g?1%中性红指示液?3ml乳糖?10g?琼脂?15～20g牛胆盐?5g?水?1000ml氯化钠?5g除乳糖、指示液、牛胆盐及琼脂外，取上述成分，混合，加热使溶解，调节pH值使灭菌后为7.2±0.2，加入琼脂，加热溶化后，再加入其余各成分，摇匀，分装，灭菌，冷至约60℃，倾注平皿。7.4-甲基伞形酮葡糖苷酸(4-Methylumbelliferyl-β-D-Glucuronide，MUG)培养基胨?10g?磷酸二氢钾?0.9g?硫酸铵?5g?磷酸氢二钠(无水)?6.2g酸锰?0.5mg?亚硫酸钠?40mg硫酸锌?0.5mg?去氧胆酸钠?1g硫酸镁?0.1g?MUG?75mg氯化钠?10g?水?1000ml氯化钙?50mg除MUG外，各成分溶解于1000ml水中，调节pH值使灭菌后为7.3±0.1，加入MUG，溶解后，每管分装5ml，115℃灭菌20分钟。8.三糖铁琼脂培养基(TSI)胨?20g?硫酸亚铁?0.2g?牛肉浸出粉?5g硫代硫酸钠0.2g?乳糖?10g?硫代硫酸钠?12.5ml蔗糖?10g?琼脂?12～15g?葡萄糖?1g?水?1000ml?氯化钠?5g除三糖、指示液、琼脂外，取上述成分，混合，加热使溶解，调节pH值使灭菌后为7.3±0.1，加入琼脂，加热溶化后，再加入其余各成分，摇匀，分装，灭菌，制成高底层(2～3cm)短斜面。9.四硫磺酸钠亮绿培养基(TTB)胨?5g?硫代硫酸钠?30g?牛胆盐?1g?水?1000ml?硫酸钙?10g取上述成分，混合，微温使溶解，灭菌。临用前，取上述培养基，每10ml加入碘溶液(取碘6g与碘化钾5g，溶于20ml水中)0.2ml和亮绿试液0.1ml，混匀。10.沙门、志贺菌属琼脂培养基(SS)胨?5g?硫代硫酸钠?8.5g?牛肉浸出粉?5g?中性红指示液?2.5ml乳糖?10g?亮绿试液?0.33ml牛胆盐?8.5g?琼脂?20g枸橼酸钠?8.5g?水?1000ml枸橼酸铁铵?1g除乳糖、指示液、琼脂外，取上述成分，混合，加热使溶解，调节pH值使灭菌后为7.2±0.1，滤过，加入琼脂，加热溶化后，再加入其余各成分，摇匀，灭菌，冷至60℃，倾注平皿。11.胆盐硫乳琼脂培养基(DHL)胨?20g?枸橼酸钠?1g?牛肉浸出粉?3g?枸橼酸铁铵?1g?乳糖?10g?中性红指示液?3ml蔗糖?10g?琼脂?18～20g?去氧胆酸钠?1g?水?1000ml?硫代硫酸钠?2.3g除糖、指示液及琼脂外，取上述成分，混合，微温使溶解，调节pH值使灭菌后为7.2±0.1，加入琼脂，加热溶化后，再加入其余成分，摇匀，冷至60℃，倾注平皿。12.溴化十六烷基三甲铵琼脂培养基