实时定量pcr与葡萄酒的酿造技术分析.pptx

实时定量PCR与葡萄酒的酿造 生物技术1301 周琪：收集资料 王星宇：收集资料 程思远：制作ppt 张楚悦：收集资料 洪文杰：回答问题 章梦瑶：回答问题 葡萄酒 葡萄酒是用新鲜的葡萄或葡萄汁经发酵酿成的酒精饮料。通常分红葡萄酒和白葡萄酒两种。前者是红葡萄带皮浸渍发酵而成；后者是葡萄汁发酵而成的。 葡萄美酒夜光杯，欲饮琵琶马上催 葡萄酒的好处 葡萄酒有增进食欲，滋补作用的作用。葡萄酒中含有糖、氨基酸、维生素、矿物质。这些都是人体必不可少的营养素。它可以不经过预先消化，直接被人体吸收。非凡是对体弱者，经常饮用适量葡萄酒，对恢复-健康有利。同时还有助于消化，葡萄酒能刺激胃酸分泌胃液，每60-100克葡萄酒能使胃液分泌增加120毫升。 葡萄酒酿造过程 最重要！ 可是在传统葡萄酒的酿造过程中仍有问题 多培养基 为了鉴定野生酵母, 出现了大量的选择性培养基。 但是到目前为止, 还没有一个单一的培养基能够鉴定所有的野生酵母。 通常需要两种甚至更多。 QPCR 与这些传统的方法相比： 实时定量代R 是一项基于稳定遗传特性的技术, 可以特异性地鉴定纯培养物( 区别贮藏酵母和爱尔酵母)； 或者野生酵母的有机体甚至混合种群( 如接种酵母)。 可是在传统葡萄酒的酿造过程中仍有问题 相似性 酿造过程中非人为接种的酵母通常被认为是野生酵母。 由于生化和生理的相似性, 区分酿酒酵母和鉴定野生酵母是很困难的。 过估计 由于野生酵母与酿酒酵母的相似性, 其细胞的数量会被过多的估计。 传统 通常将野生酵母分为酵母层和非酵母层。 什么是实时定量PCR？ 实时荧光定量PCR： 利用针对目的基因所设计的一对特异性寡核普酸引物，以目的基因为模板进行的DNA体外合成反应的技术。此技术的目的是将DNA片段经过若干次解链和复性循环，大量扩增，以便对已知DNA片段进行分析，如基因分析、序列分析、进化关系分析等。 实时定量PCR仪 应用实例 用RAPD技术分析所得到的基因组指纹图谱，已被用于研究中试规模的反应器中微生物在一段时间内种群结构的变化情况。邢德峰等从制氢反应器中取得厌氧产氢污泥，并通过细胞裂解直接提取其基因组DNA，以细菌16S rDNA基因通用F338GC/R534进行V3高变异区域PCR扩增，得到长约200 by的PCR产物，然后采用其它分子生物学技术(如DGGE)分析了制氢反应器中微生物的多样性。 用实时定量代R技术与现有培养分离相结合的方法来提高区分酿酒酵母和鉴定野生酵母的准确度和灵敏度 材料： 菌种： 酿酒酵母菌株 模式菌株 富集： 为了检测野生酵母的污染程度, 灭菌后的熟啤酒中接人酿酒酵母, 酵母细胞的浓度达到10^7个细胞/mL, 然后将野生酵母以10^4/mL 的量接人熟啤酒中, 进行富集。 DNA提取： 实时定量PCR分析： 结果 区分了酿酒酵母 检测了野生酵母 局限性 由于实时定量PCR精度要求高，生产过程中所用到的生产工具或者检测工具中少量的污染会较大程度的影响检测结果。 Critical thinking！ 谢谢