第3章临床微生物学检验技术2课稿.ppt

墨汁染色 【目的】常见诊断由新生隐球菌引起的条件致病性真菌感染。主要用于脑脊液。也可用于其他有荚膜的微生物，如炭疽杆菌的透明荚膜等。 印度墨水（INDIAN INK）放在操作台架子左上层。 操作：脑脊液离心10分钟后，取沉渣加一滴印度墨水，加盖玻片，镜检。先低倍、后高倍；找有透明荚膜的菌体，观察有无芽生孢子。新生隐球菌墨汁染色，可见圆形厚壁孢子，菌体直径约4～20μm，外围有一透光的厚荚膜，厚度约5～7μm，荚膜内的菌体可出芽或不出芽，孢内有一较大的反光颗粒（脂质颗粒，不是孢核）和许多小颗粒，可与白细胞或淋巴细胞相鉴别。 内 容 微生物鉴定 标本处理 血培养 脑脊液培养 呼吸道标本 (痰标本、咽部标本） 尿培养 生殖道标本培养 抽吸物和组织标本的培养（需氧、厌氧培养） 粪便培养 尿道感染 尿液标本 ?采集中段尿时要先用肥皂清洗女性的外阴和男性的外生殖器包括包皮内，然后用清水冲洗 ?长期留置导尿管的患者应在更换新管时留取尿标本。 ? 做厌氧培养时应耻骨上膀胱穿刺采集尿。 微生物鉴定 微生物鉴定（1） 血平皿上的菌落形态 革兰阳性细菌 所有的链球菌 β-溶血链球菌 α-溶血链球菌与肺炎链球菌 葡萄球菌属 肠道革兰阴性杆菌 沙门菌属，志贺菌属 假单胞菌属 嗜血杆菌属 微生物鉴定（2） 奈瑟菌属、莫拉菌属 不动杆菌属 布氏杆菌属、巴斯德菌属 芽胞杆菌属 产单核李斯特菌 酵母菌属 药敏试验 纸片扩散法药敏试验 特殊药敏试验 MRSA 克林霉素耐药的葡萄球菌 VISA或VRSA 青霉素耐药的葡萄球菌 超广谱β-内酰胺酶 女性生殖道标本送检 宫颈或宫颈内部：淋病奈瑟菌，沙眼衣原体，人乳头瘤病毒 阴道高位拭子：酵母菌，阴道毛滴虫，细菌性阴道感染 肛门或直肠拭子：淋病奈瑟菌，B群链球菌（+阴道拭子） 女性下生殖道标本采集 早发B群链球菌病 1%的新生儿因母亲定植（10-30%的孕妇）发展为EOD 50%病死率 25%的美国女性在LD期间得到IV预防 长期病症包括：在30%以上的新生儿中产生严重精神运动发展障碍 Adriaanse et al. Neonatal early onset group B streptococcal infection: a nine-year retrospective study in a tertiary care hospital. J Perinat Med. 1996;24:531–538 在孕期35～37周时的普查培养 阴道和直肠拭子 肉汤过夜增菌 接种于血平板上 再孵育过夜和鉴定可疑菌落 任何有GBS菌尿的患者需要在分娩期做好预防 分娩时快速检测敏感性不够 男性生殖道标本送检 ?男性的生殖道致病菌与女性绝大部分一致； ?尿道炎通常由淋病奈瑟氏菌或非淋病奈瑟氏菌引起； ?可能并发于生殖器溃疡； 淋病奈瑟氏菌感染 ? 挤压尿道或直接获取尿道口分泌物； ?直接涂片 ?如果培养，须直接接种温暖的筛选性平板，保温并即刻送微生物室培养。 任何不能及时送检的生殖道标本，都应采用运送培养基采样保存。 禁止冷藏 标本采样和送检 ? 临床常常送检脓液和渗出液的拭子给实验室做检查。风险 标本不足量 拭子干燥 拭子吸附细菌，难于释放到平板培养 ? 尽可能抽吸或将拭子深入伤口，紧贴伤口前沿取样深部伤口和特殊原因造成的伤口，如动物咬伤，应考虑厌氧培养； 发现 评述 出现鳞状上皮细胞 提示标本采集技术不过关；培养出来的可能是皮肤正常菌群 大量的中性粒细胞 如果查见细胞内的细菌，则更有意义。 大量的中性粒细胞染色多样染色阳性和阴性，小的细菌 混合有厌氧或兼性厌氧菌感染 出现少量破碎的中性粒细胞和比较大的面包车样的染色不定的杆菌 可能是梭菌引起的组织坏死，紧急外科手术，产气荚膜梭菌引起的气性坏疽 很少有中性粒细胞，但是有其他体细胞 患者不能产生足够的免疫反应或微生物不能趋化中性粒细胞（如球菌）。仍然高度怀疑细菌病因。 细胞内微生物 细菌感染 成块的小的灰白的染色不规则的阳性成链的球菌 如果分离自脓肿，提示咽峡炎链球菌（米勒链球菌）感染。 很细小的革兰氏阴性杆菌 特别是从淋巴结或组织中分离的，可能是生物恐怖试剂（布鲁氏杆菌，耶尔森，弗朗西斯）要在风厨中操作。平板用胶条密封在生物安全柜中操作，不可以嗅标本。 组织和抽吸物涂片检查 上呼吸道标本 Upper Respiratory Tract Specimens 下呼吸道标本 L