夏盛葡萄糖氧化酶技术分析.pptx

夏 盛 饲 料 酶 部 说出你的需要，剩下的事交给我们来办! 全国酶制剂行业重点生产企业  2 内容提纲 3 葡萄糖氧化酶简介 葡萄糖氧化酶是一种氧化还原酶，在分子氧的存在下，专一地氧化β-D-葡萄糖生成D-葡萄糖酸内酯，同时消耗氧，生成过氧化氢；过氧化氢在过氧化氢酶作用下，分解生成水和1/2氧，而后水又与葡萄糖酸内酯结合产生葡萄糖酸。 在此过程中，葡萄糖氧化酶的特点是能够消耗氧气，催化葡萄糖氧化，最终产物是葡萄糖酸。 GOD催化β-D-葡萄糖的速度是催化α-D-葡萄糖的150倍. 反应方程式： 葡萄糖氧化酶的来源 1904年发现于黑曲霉菌丝； 1928年确定它是一种氧化还原酶，也是成功应用于工业的少数几种非水解酶之一； 1960 年Kusai等、1964 年Pazur和Swobodda分别从青霉和黑曲霉中提纯葡萄糖氧化酶。 1995 年 , Petruccioli等用青霉的突变株生产出葡萄糖氧化酶。 1999年农业部将其定为12种允许使用的饲用酶制剂之一； 目前生产上一般采用的霉菌是黑曲霉和青霉属菌株。 5 《允许使用的饲料添加剂目录》 青霉 黑曲霉 不同菌种来源对比 菌种 特异青霉 黑曲霉 分子量 150kD 152kD 碳氢化合物 11% 16% 氨基酸 （赖氨酸、苯丙氨酸）较多 （组氨酸、精氨酸、酪氨酸）较多 Km(米氏常数) 11 30 Vmax 值 925 458 Km表示酶和底物之间的亲和能力，Km值越大，亲和能力越弱，反之亦然。 在同等底物浓度的条件下，Km值越大，其所需的酶浓度越大，即所需添加量也越大。 （引自 ?Biotechnology Advance? 27(2009): 489-501） 7 反应时间 pH值 剩余葡萄糖值（%） 特异青霉 黑曲霉 特异青霉 黑曲霉 0h 8.0 18.2 1h 6.33 6.8 17.1 17.7 3h 6.21 6.56 15.5 16.3 6h 6.14 6.37 14.4 15.4 8h 5.71 6.05 7.9 9.1 目的：比较特异青霉和黑曲霉的产物生成量及底物消耗量 步骤：配制18%葡萄糖溶液，测定初始葡萄糖含量，加入一定量碳酸钙，调试pH值，分别加入同等活力不同来源葡萄糖氧化酶，以及过量过氧化氢酶，磁力搅拌器，用鼓风机通入一个大气压的空气，保持氧气充足。 葡萄糖氧化酶—酶学特性 在pH为4.0～8.0之间具有很好的稳定性，最适 pH 值为6.0 9 葡萄糖氧化酶—酶学特性 枯草杆菌蛋白酶(pH6.0)、胰蛋白酶(pH6.8)和胃蛋白酶(pH4.5)不能分解 葡萄糖氧化酶—酶学特性 作用温度为20℃～60℃, 最适温度35℃ 耐温性能良好，经85℃处理1min,酶活保持在80%以上 耐温性能 15%湿度条件下，混合葡萄糖氧化酶和饲料后制粒结果 12 存储稳定性良好，避光、干燥处保存12个月活力不低于90%。 在畜禽机体内的作用机理及功效 清除过量自由基 保持肠道上皮完整 减少病原入侵 消除肠道病原菌生存环境，保持肠道菌群生态平衡 提高消化酶活， 改善饲料品质， 提高饲料消化率 缓解霉菌毒素中毒 保护肠道健康 维护肠道健康、提高免疫功能，促进消化吸收、替代抗生素、预防霉菌毒素中毒 1/2O2 ＋ （一）保持肠道上皮细胞的完整，抑制球虫和病原菌的入侵 1994年赵文等在《氧自由基与肠道损伤》中表明：机体内产生的氧自由基会破坏肠道上皮细胞的完整性造成肠道损伤。 在葡萄糖氧化酶催化的反应过程中，可以清除氧自由基，保护肠道健康，从而抑制病原菌入侵。 14 GOD的还原过程 15 GOD组0~15日龄0.20%GOD拌料；16~60日龄用0.12%~0.16%GOD拌料，如有球虫则饮水添地克珠利 1~3d。对照组15日龄起饮水添加地克珠利至 60日龄出舍，发生球虫病则饮三维治球粉 3d。 (引自《湖北畜牧兽医》,2004(1):31-33) 备注：GOD酶活15u/g 16 (引自《河北农业大学》，1997,1(4)) 空白对照：不攻毒攻毒对照和试验组：进行鸡白痢沙门氏菌攻毒，其中试验组，攻毒后进行治疗。 备注：GOD酶活15u/g （二）改善胃肠道酸性环境，促进营养物质消化吸收 催化葡萄糖生成葡萄糖酸，在肠道内发挥酸化剂的作用，创造酸性环境；降低胃中的pH值，激活胃蛋白酶，促进营养物质的消化吸收；； 17 备注：GOD酶活15u/g （三）促进肠道益生菌的定殖，清除有害菌的繁殖。 生成的葡萄糖酸可降低胃肠内PH值，为乳酸菌生长制造酸性环境； 葡萄糖氧化酶能催化葡萄糖去除肠道内氧气，为厌氧有益菌双歧杆菌的增殖制造厌氧环境； 18 备注：GOD酶活15u/g （四