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酶免疫测定技术 郭先锋 山西医科大学第二医院检验科 免疫凝集试验 直接免疫凝集试验 玻片法 ？ 试管法 ？ 间接免疫凝集试验 类型 正向间接免疫凝集试验 反向间接免疫凝集试验 间接免疫凝集抑制试验 协同免疫凝集试验 常用的 间接免疫血凝试验 举例？ 颗粒免疫凝集试验 胶乳颗粒凝集试验 举例？ 明胶颗粒凝集试验 举例？ 炭颗粒凝集试验 举例？ 甲苯胺红颗粒凝集试验 举例？ 免疫沉淀试验 液相免疫沉淀试验 絮状免疫沉淀试验 透射免疫比浊试验 散射免疫比浊试验 凝胶内免疫沉淀试验 免疫扩散试验（单扩，双扩） 免疫电泳技术（对流免疫电泳，火箭免疫电泳，免疫区带电泳，免疫固定电泳） 标记免疫技术 标记免疫技术： 将试剂抗原或试剂抗体用可以微量检测的标记物（常用标记物：放射性核素、荧光物质、酶、化学发光剂、胶体金等）进行标记，试剂与标本中相应的抗体或抗原反应后，测定抗原抗体复合物中的标记物，这种免疫技术称标记免疫技术 酶免疫试验 概述： 1. 将试剂抗原或试剂抗体用酶进行标记，试剂与标本中相应的抗体或抗原反应后，测定复合物中的酶，这种免疫技术，称为酶标记免疫技术。 2.分类：酶免疫组化技术 酶免疫测定技术 均相法 异相法 固相酶免疫试验 液相酶免疫试验 均相法：不需分离复合物与游离标记物即可直接测定的方法。 异相法 需分离复合物与游离标记物后测定 临床上最常用的固相酶免疫试验是ELISA和免疫印迹 酶联免疫吸附试验(ELISA) ELISA的原理和类型 一、基本要求： 1. 使Ag(或Ab)结合到某种固相载体 （ ？）表面，并保持免疫活性。 免疫吸附剂 2. 使Ag(或Ab)与某种酶结合，既保持免疫活性，又有酶的活性。 酶结合物 3. 标本、酶标记物能按一定的次序与固相载体表面的Ag(或Ab)结合，加入酶的底物后能产生有色反应。 底物 二、必备试剂： 固相的Ag或Ab----免疫吸附剂 酶标记的Ab或Ag----结合物 酶反应的底物-------底物 三、方法类型： 夹心法（双抗体或双抗原） 间接法 检测抗体 竞争法 测抗体或抗原 捕获法测IgM抗体 3.竞争法 Ag ※ Ag※Ab + Ab Ag(标本) (定量) AgAb 4 捕获包被法测抗体 IgM抗体的检测用于传染病的早期诊断中。间接法ELISA一般仅适用于检测总抗体或IgG抗体。如用抗原包被的间接法直接测定 IgM抗体，因标本中一般同时存在较高浓度的IgG抗体，后者将竞争结合固相抗原而使一部份IgM抗体不能结合到固相上。因此如 用抗人IgM作为二抗，间接测定IgM抗体，必须先将标本用A蛋白或抗IgG抗体处理，以除去IgG的干扰。在临床检验中测定抗 体IgM时多采用捕获包被法。先用抗人IgM抗体包被固相，以捕获血清标本中的IgM（其中包括针对抗原的特异性IgM抗体和非 特异性的IgM）。然后加入抗原，此抗原仅与特异性IgM相结合。继而加酶标记针对抗原的特异性抗体。再与底物作用，呈色即与标 本中的IgM成正相关。此法常用于病毒性感染的早期诊断。 ELISA的技术要点 一、试剂制备 ㈠ 免疫吸附剂 ㈡ 酶标记抗原或抗体 二、反应条件的选择 ㈠ 酶标二抗浓度选择 ㈡ 包被抗原浓度的选择 三、操作标准化 一、试剂制备： ㈠ 免疫吸附剂 固相载体 ⑴ 要求： ① 吸附力强 ② 能保持Ag或Ab活性