中性粒细胞吞噬功能测定技术分析.pptx

小吞噬细胞吞噬功能测定——细菌计数法 2014级麻醉学1班——张先刚 学号：1410550160 实验目的 熟悉中性粒细胞的生物学特性及其意义、观察机体的非特异性免疫现象 掌握血液中的中性粒细胞体外吞噬异物能力的测定方法及用途 小吞噬细胞 即是中性粒细胞； 来源于骨髓造血干细胞； 占白细胞总数的60%~70%； 生命周期短，不能分裂； 细胞核呈多叶状，胞质内含多种颗粒： 颗粒内含髓过氧化物酶、防御素、溶菌酶、组蛋白酶、乳铁蛋白、碱性磷酸酶等。 中性粒细胞所特有，巨噬细胞没有这种酶，为中性粒细胞在细胞化学法上的标志。 中性粒细胞生物学特性： A、在抗化脓性细菌感染中起主要防御作用 B、引起感染部位急性炎症反应 C、参与超敏反应（如Ⅲ型超敏反 应），引起机体免疫病理损伤。 实验原理 吞噬细胞可以通过趋化、调理、吞入和杀菌等步骤，能吞噬和消化衰老、损伤及病原微生物等异物，是机体固有免疫的重要组成部分。在一定条件下，将白细胞悬液与细菌混合，保持一段时间后，取样涂片染色镜检，可以测定中性粒细胞吞噬细菌的百分率和吞噬指数。该实验可助诊断吞噬细胞功能障碍的疾病。 实验材料 1、菌液：表皮葡萄球菌菌液（9亿/ml） 2、抗凝剂：3.8%枸缘酸钠或肝素（25U/ml） 3、毛细吸管、凹玻片、载玻片、牙签、甲醇、瑞特-吉姆萨染料、pH=6.4 PB、酒精棉球、采血针、显微镜、香柏油、洗镜油等。 实验流程 取凹玻片一张，在凹孔中加1滴（0.4ml）3.8%枸缘酸钠或者肝素（25U/ml） 酒精棉球消毒左手无名指后，用采血针在消毒部位取血2~3滴（约0.2ml），加入凹孔中混匀。 加表皮葡萄糖液1滴（0.02~0.04ml），后用牙签轻轻搅拌混匀。 将凹玻片放在湿盒内，置于37℃孵箱30~45min。 取一滴于载玻片上，制成薄涂片，自然干燥。 置于瑞氏液中，1min后取出。 置于pH=6.4 PB中， 3min后取出。 置于吉姆萨染液中，5~10min后取出 蒸馏水洗（平持玻片，在一端加水，使染液“漂走”），待干，镜检。 实验结果 在油镜下可细胞核及被吞噬的细菌被染成紫色，而中性粒细胞的胞浆被染成淡红色。 被吞入细菌 指标检测 1、吞噬百分率= 100个中性粒细胞中吞噬了细菌的细胞数 100 2、吞噬指数= 100个中性粒细胞吞噬的细菌总数 100 ×100% 人吞噬百分率正常参考值：62%~76% ×100% 人吞噬指数正常参考值：1.32~1.72 注意事项 1、中性粒细胞吞噬活性在37℃时最好，温度过 高或者过低均会使其吞噬能力减低； 2、个体差异、年龄、健康状况的不同，其吞噬能力不同； 3、掌握好中性粒细胞与细菌的作用时间（中性粒细胞对细菌吞噬非常迅速，5min左右吞噬率达45%，10min左右接近80%，20min左右即达平台）。 4、制片之前要混匀，涂片过薄、过厚都会影响观察。 That’s all. Thank you!