内毒素葡聚糖开展研究报告.ppt

微生物室新开项目简介 (1-3)-?-D-Glucan(葡聚糖)与细菌内毒素 对于侵袭性真菌感染…… 诊断滞后,治疗手段有限 基础疾病 病死率很高 念珠菌血症若不治疗死亡率可以达到45-76%，侵袭性曲霉病死亡率高达55-70% 诊断方法 显微镜检查 培养 血清学 分子生物学 镜检和培养方法 非培养方法优点 快速报告结果 敏感性提高 取材简便 多以真菌在致病状态产生的物质为检测标志物，结果阳性提示有致病性 定量检测可判断感染严重程度及疗效评估 非培养诊断的方法简介 真菌细胞壁成分 （1-3） - β- D-葡聚糖检测（G试验） 真菌抗原检查 半乳甘露聚糖（galactomannan) 抗原（GM) 甘露聚糖(mannan)抗原 隐球菌荚膜多糖抗原（乳胶凝集试验） 真菌特异的代谢产物 D-阿拉伯糖醇 真菌 DNA 的检测 深部真菌感染的诊断标准EORTC/MSG2008修订版 宿主因素 临床特征 病原学 真菌镜检 真菌培养 组织病理学检查 血清学检查方法（间接证据） CSF隐球菌抗原阳性——确诊 GM-test, G-test——临床诊断 (1-3)-?-D-Glucan(葡聚糖) “G”试验 (1-3)-?-D-Glucan生物活性 (1-3)-?-D-Glucan作为真菌细胞壁成分之一，一旦进入机体后，将引起真菌病，严重时将会引起严重的深部真菌感染疾病，因此,深部真菌感染对患者的健康与生命构成严重威胁. 传统检测方法为真菌培养，一是周期长，二是阳性率特别低． 主要是抗生素类药物的滥用所引起． 真菌感染出现逐渐上升趋势． “G”试验缘何而来？ 比浊法反应机理 细菌内毒素 （1-3）?-D-Glucan LAL-RM(反应物) 因子C 活化因子C ? 因子B 活化因子B 活化因子G 因子G ?  凝固酶原 凝固酶 ? ? 凝固蛋白原 凝固蛋白（凝胶） 定量浊度仪 Turbidimetric technique GEL ?－D－葡聚糖的价值 酵母菌、丝状真菌细胞壁成分 不仅检测曲霉菌，还可以检测念珠菌、镰刀菌、毛孢子菌、支顶孢属 不能检测：隐球菌和接合菌 美国FDA已批准，欧洲部分国家已注册 　中国SFDA已获批准进入　临床应用 敏感性、特异性：90％左右 ?－D－葡聚糖的价值 美国大多数研究限于念珠菌菌血症 其他真菌感染（侵袭性曲霉菌病）的研究资料少 假阳性：血液透析(纤维素滤膜）；接受血制　　　　品治疗（免疫球蛋白） 抗生素对结果的影响？？ 假阳性问题 污染（无热源的试管、枪头和蒸馏水等） 血液透析、腹膜透析 纱布或其他医疗物品（外科手术） 某些品牌的静脉制剂（白蛋白、凝血因子、免疫球蛋白等） 抗肿瘤多糖（香菇多糖） 某些细菌败血症患者（尤其是链球菌败血症） 假阳性与应用β内酰胺类抗生素无关 对策: 动态监测葡聚糖的变化 ?－D－葡聚糖（G试验）的缺陷 　标本采集 　不能鉴定何种真菌感染 ?－D－葡聚糖参考值 健康人： 　　 10 pg/ml 可疑感染：10 ~ 20 pg/ml 深部真菌感染： 20 pg/ml 关于G试验建议 G试验临床应用 1　明确诊断 　　（抗真菌药物治疗前） 　2　治疗效果监测 　　（抗真菌药物治疗后） 　3　连续2次采血进行G试验 细菌内毒素检测的临床应用 内毒素的定义 概念 内毒素（endotoxin）是革兰氏阴性细菌细胞壁结构中的脂多糖（Lipopolysaccharide LPS），这些成分只在细菌死亡裂解后才释放到菌体外或活菌以发泡形式将其释出。 内毒素结构 LPS由三部分组成： 1 最外层；特异性多糖－菌体多糖(O抗原) 与细菌侵袭力有关 2 中间 ： 核心多糖 3 内层： 类脂A 对宿主有多种毒害作用而无种属特异性 内毒素的生物学活性（1） 刺激体内单核巨噬细胞系统合成分泌多种细胞因子如：TNF-a、Il-1、IL-6、IL-12等，通过这些介质直接或间接发挥局部及全身效应，导致过度的全身炎症反应及组织器官损害。 内毒素的生物学活性（2） 1 可与多种组织的实质细胞结合直接导致细胞损伤。 2 激活凝血、纤溶、补体系统，诱发 DIC 作用于a－受体，促使肾上腺儿茶酚胺分泌，导致微循环障碍、血浆外渗，休克。 3 发热、白细胞减少等反应。 参考范围 10pg/ml以下 ： 健康人值 10-20pg/ml ： 病变观察期 大于20pg/ml ： 内